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Título: Micropropagação da bananeira: características anatômicas, brotações múltiplas e conteúdo de DNA
Autor(es): Silva, Renata Alves Lara
Orientador: Pasqual, Moacir
Membro da banca: Castro, Evaristo Mauro de
Pereira, Roselaine Cristina
Pio, Leila Aparecida Salles
Área de concentração: Produção Vegetal
Assunto: Anatomia foliar
Qualidade espectral da luz
Benzilaminopurina (BAP)
Citometria de fluxo
Leaf anatomy
Spectral quality
Flow cytometry
Data de Defesa: 17-Fev-2012
Data de publicação: 2013
Agência de Fomento: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Referência: SILVA, R. A. L. Micropropagação da bananeira: características anatômicas, brotações múltiplas e conteúdo de DNA. 2012. 101 p. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2012.
Resumo: Objetivou-se avaliar o efeito da qualidade luminosa sobre diferentes características anatômicas de genótipos de bananeira aclimatizados sob malhas coloridas, avaliar a formação de múltiplas brotações e estabilidade genética a partir de ápices caulinares de bananeira ‘Ouro’ em meio suplementado com elevada concentração de benzilaminopurina (BAP) e avaliar o desempenho de softwares comumente utilizados em análises de citometria de fluxo por meio da análise do conteúdo de DNA e coeficiente de variação (CV) gerados por eles. Para as análises anatômicas, foram coletados segmentos foliares de mudas micropropagadas de 5 genótipos de bananeira (Maçã, Thap Maeo, Caipira, PA 42-44 e Princesa) cultivados por 90 dias sob malhas coloridas (branca, azul, preta e vermelha). Foram avaliadas: densidade estomática, funcionalidade dos estômatos e espessuras de epiderme, hipoderme, parênquima paliçádico e parênquima esponjoso. Os resultados mostram que a anatomia foliar sofre modificações com a utilização de malhas coloridas e que todas elas, à exceção da preta, favorecem o desenvolvimento de caracteres anatômicos, com destaque para a malha branca. Para as análises de múltiplas brotações, ápices meristemáticos de bananeira ‘Ouro’ foram estabelecidos in vitro, em tubos de ensaio contendo meio MS suplementado com 2,5 mg L-1 de BAP, 0,1 mg L-1 de AIA, 10 mg L-1 de ácido ascórbico, 30 g L-1 de sacarose e 1,8 g L-1 de phytagel. O pH foi ajustado para 6,2. Os tubos ficaram 15 dias no escuro e mais 15 dias em ambiente iluminado. Após esse período, os ápices foram submetidos aos tratamentos com duas concentrações de BAP (2,5 e 22,5 mg L-1) em meio MS com todas as suplementações do meio de cultura anterior. O delineamento foi inteiramente casualizado, com 15 repetições. Após 45 dias, realizaram-se a contagem do número de brotações e a análise de citometria de fluxo. Os resultados mostram que os explantes submetidos à concentração de 22,5 mg.L-1 de BAP não são eficientes na formação de múltiplas brotações e que essa concentração promove perda de DNA nos explantes. Para verificar o desempenho dos softwares, foram preparadas amostras para citometria de fluxo, utilizando 25 segmentos foliares recém-coletados de bananeira ‘NBA’. As leituras foram realizadas em citômetro de fluxo FACSCalibur (BD) e os histogramas obtidos com o software CellQuest™. O conteúdo de DNA e o CV foram obtidos por meio dos softwares CellQuest™, WinMDI™, FlowJo™ e FCS Express™. Não houve diferença significativa para o conteúdo de DNA entre os diferentes softwares, porém, o WinMDI™ mostra menor precisão nas análises, ao contrário dos demais.
Abstract: The objective was to evaluate the effect of spectral quality of light of 5 banana genotypes through the use of different colored shading nets in anatomical traits, evaluate the formation of multiple shoots and genetic stability from shoot tips of banana ‘Ouro’ in medium supplemented with high concentration of benzylaminopurine (BAP) and evaluate the performance of softwares commonly used in flow cytometry analysis, by analyzing DNA content and the coefficient of variation (CV) generated by them. For anatomical analysis, leaf segments of micropropagated seedlings of 5 banana genotypes (‘Maçã’, ‘Thap Maeo’, ‘Caipira’, ‘PA 42-44’ and ‘Princesa’) grown for 90 days under colored shading nets (white, blue, black and red) were collected. The traits evaluated were: stomatal density, stomata functionality and thickness of epidermis, hypodermis and parenchyma. The results showed that the leaf anatomy has changed with the use of colored nets and all of them, except the black net, favor the development of anatomical traits, especially the white shading net. For the analysis of multiple shoots, meristematic tips of banana ‘Ouro’ were established in vitro in tubes containing MS medium supplemented with 2.5 mg L-1 BAP, 0.1 mg L-1 AIA, 10 mg L -1 ascorbic acid, 30 g L-1 sucrose and 1.8 g L-1 phytagel. The pH was adjusted to 6.2. The tubes were left in the dark for 15 days and after for 15 days in a bright environment. After this period, the apices were subjected to treatment with two concentrations of BAP (2.5 and 22.5 mg L-1) in MS medium with all supplementation of the previous culture medium. The design was completely randomized with 15 repetitions. After 45 days the number of shoots was counted and flow cytometry analysis was made. The results showed that the explants subjected to the concentration of 22.5 mg L-1 BAP were not efficient in the formation of multiple shoots and this concentration causes loss of DNA in the explants. To verify the performance of softwares, samples were prepared for flow cytometry analysis using 25 fresh leaf segments from banana ‘NBA’. The readings were taken in flow cytometer FACSCalibur (BD) and the histograms were obtained with the CellQuest ™ software. DNA content and CV were obtained through softwares CellQuest™, WinMDI™, FlowJo™ and FCS Express™. There was no significant difference in DNA content between the different softwares, but the software WinMDI ™ showed lower accuracy in the analysis while CellQuest™, FlowJo™ and FCS Express™ were found to generate analysis more reliable.
Informações adicionais: Dissertação apresentada à Universidade Federal de Lavras, como parte das exigências do Programa de Pós-Graduação em Agronomia/Fitotecnia, área de concentração em Produção Vegetal, para a obtenção do título de Mestre.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/1043
Publicador: UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
Idioma: pt_BR
Aparece nas coleções: DAG - Agronomia/Fitotecnia - Mestrado (Dissertações)

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