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Título: Seleção, caracterização e clonagem dos genes fljB e groEL agonistas dos receptores de reconhecimento de padrão do sistema imune das aves
Autor(es): Soares, Bruno Antunes
Orientador: Peconick, Ana Paula
Coorientador(es): Barrios, Priscilla Rochele
Membro da banca: Costa, Geraldo Márcio da
Martins, Nelson Rodrigo da Silva
Área de concentração: Ciências Veterinárias
Assunto: Imunologia
Proteína recombinante
PAMP
Flagelina
DAMP
HSP60
Immunology
Recombinant protein
Flageline
Data de Defesa: 27-Fev-2013
Data de publicação: 2013
Agência de Fomento: Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG)
Referência: SOARES, B. A. Seleção, caracterização e clonagem dos genes fljB e groEL agonistas dos receptores de reconhecimento de padrão do sistema imune das aves. 2013. 71 p. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2013.
Resumo: A produção recombinante de agonistas dos receptores do reconhecimento de padrão do sistema imune inato tem fornecido uma nova ferramenta para a produção de imunoestimulantes para mamíferos. O padrão molecular associado ao patógeno (PAMP), flagelina, codificado pelo gene fljB da S. Typhimurium e o padrão molecular associado ao dano (DAMP) HSP60, codificado pelo gene groEL da S. Typhimurium e S. Enteritidis, são reconhecidos por receptores de reconhecimento de padrões (RRPs) do sistema imune inato das aves. No presente estudo, foi feita a clonagem de fragmentos genéticos dos genes fljB da S. Typhimurium e groEL da S. Typhimurim e S. Enteritidis inseridos no vetor de expressão pET100/D-TOPO e transformados em células de E. coli TOP10. Os clones foram avaliados pela PCR de colônia, PCR de DNA plasmidial e sequenciamento genômico para a confirmação da presença desses genes. Na PCR de colônia, foram identificadas em 80%, 60% e 80% das colônias transformadas, a presença dos genes groEL (S. Enteritidis), groEL (S. Typhimurium) e fljB (S. Typhimurium) respectivamente. O sistema de clonagem adotado possibilitou a produção de clones idênticos dos fragmentos genéticos da HSP60 e flagelina das cepas de Salmonella, permitindo a utilização posterior desses clones em ensaios de expressão gênica, com potencial futuro de serem utilizados como imunoestimulante inespecífico das aves.
The recombinant production of innate immune system pattern recognition receptor agonists has provided a new tool for the production of immunostimulants for mammals. The molecular pattern associated to the pathogen (PAMP), flageline, coded by the fljB gene of the S. typhimurium and the molecular pattern associated to the damage (DAMP), HSP60, coded by the groEL gene of the S. typhimuriumand S. enteritidis, are recognized by pattern recognition receptors (PRRs) of bird innate immune system. In the present study, we performed the cloning of genetic fragments of genes fljB from the S. typhimurium and groEL from the S. typhimurium and S. enteritidis inserted in expression vector pET100/D-TOPO and transformed in E. coli TOP10 cells. The clones were evaluated by colony PCR, plasmidial DNA PCR and genome sequencing in order to confirm the presence of these genes. In the colony PCR, we identified the presence of the genes groEL (S. enteritidis), groEL (S. enteritidis) and fljB (S. typhimurium) in 80%, 60% and 80% of the transformed colonies, respectively. The cloning system adopted allowed the production of clones identical to the HSP60 genetic fragments and flaneline of the Salmonella strains, allowing the posterior use of these clones in gene expression trials, with the future potential of being used as non-specific immunostimulant for birds.
Informações adicionais: Dissertação apresentada à Universidade Federal de Lavras, como parte das exigências do Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, área de concentração em Ciências Veterinárias, para a obtenção do título de Mestre. ARTIGO 1 - Seleção, caracterização e clonagem dos genes fljB e groEL agonistas dos receptores de reconhecimento de padrão do sistema imune das aves
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/1093
Publicador: UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
Idioma: pt_BR
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