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Please use this identifier to cite or link to this item: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/12169

Title: Análise do gene OsGLR3.1 na tolerância ao déficit hídrico em tabaco
???metadata.dc.creator???: Andrade, Jéssica de Castro e
???metadata.dc.contributor.advisor1???: Diniz, Leandro Eugenio Cardamone
???metadata.dc.contributor.referee1???: Silva, Anderson Tadeu
???metadata.dc.contributor.referee2???: Rodrigues, Leonardo Augusto Zebral
Keywords: Fumo – Transformação genética
Estresse hídrico
Expressão gênica
Tobacco – Genetic transformation
Water stress
Gene expression
???metadata.dc.date.submitted???: 16-Sep-2016
Issue Date: 20-Jan-2017
???metadata.dc.description.sponsorship???: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Citation: ANDRADE, J. de C. e. Análise do gene OsGLR3.1 na tolerância ao déficit hídrico em tabaco. 2016. 60 p. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia Vegetal)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2016.
???metadata.dc.description.resumo???: A transformação genética possibilita a inserção de genes de interesse no genoma da planta, tornando possível também desde a caracterização funcional do gene inserido até a aquisição de plantas geneticamente modificadas mais tolerantes ao déficit hídrico. A partir da transformação genética de N. tabacum, no presente trabalho buscou-se analisar a expressão do gene Os GLR3.1, que foi identificado como sendo diferencialmente expresso em plantas de Oryza sativa quando submetidas ao déficit hídrico. GLR é uma família de genes receptores de glutamato em plantas, sendo assim chamada devido à similaridade na sequência de aminoácidos que codifica e pela estrutura secundária aos receptores de glutamato ionotrópicos de animais (iGluRs). Explantes foliares de tabaco passaram pelo processo de transformação genética via Agrobacterium tumefaciens. Após o cocultivo, os explantes foliares foram inoculados em meio MS + Timentin e agente seletivo PPT. Os brotos vindos do explante e selecionados pelo PPT foram subcultivados in vitro até a formação das plântulas. A confirmação das plantas transformadas foi realizada por PCR convencional que amplificou para um amplicon de 413pb. Dos eventos confirmados com a inserção do transgene, dois eventos apresentaram uma única cópia no genoma da planta pela análise em PCR quantitativa. Plantas desses dois eventos de cópia única e plantas controle, que não passaram pelo processo de transformação,foram submetidas ao experimento de déficit hídrico, induzido por PEG6000 (polietilenoglicol). Para verificar a expressão do transgene, as folhas foram coletadas no tempo 0h, 6h e 24h para extração do RNA. Após a extração e a síntese do cDNA, foi realizada a PCR quantitativa para avaliar o perfil de expressão do transgene e de outros genes (NtDREB2A, NtPYR1 e NtGLR3.4), determinado pela fórmula de Pfaffl. O perfil de expressão do transgene demonstrou ser constante nas plantas transformadas em condição normal e em condição de estresse induzido e a inserção do gene OsGLR3.1 afetou moderadamente a expressão dos outros genes avaliados, tornando-se inconclusiva a resposta desse gene à tolerância ao déficit hídrico.
Abstract: The genetic transformation allows the insertion of genes of interest in the plant genome, making it possible, the functional characterization of the inserted gene until the acquisition of genetically modified plants more tolerant to drought. From the genetic transformation of Nicotiana tabacum, this study aimed to analyze the expression of OsGLR3.1 gene, which was identified as differentially expressed in Oryza sativa when submitted to drought. GLR is a family of glutamate receptor genes in plants are so-called because of the similarity in amino acid sequence encoding by the secondary structure and to ionotropic glutamate receptors animals (iGluRs). Tobacco leaf explants underwent the genetic transformation process via Agrobacterium tumefaciens. After cocultivation, the leaf explants were cultured on MS medium + Timentin and PPT selection agent. The coming of the explant shoots and selected by PPT were subcultured in vitro until the formation of seedlings. Confirmation of transformed plants was performed by standard PCR amplified amplicon for 413pb. The plants confirmed with the insertion of the transgene, two events had a single copy in the genome of the plant by quantitative PCR analysis. These plants and control plants, which have not undergone the transformation process were subjected to water stress experiment induced by PEG6000 (polyethylene glycol). Order to verify the expression of the transgene, the leaves was collected at time 0h, 6h and 24h for RNA extraction. After extraction and cDNA synthesis was performed quantitative PCR to assess the transgene expression profile and other genes (NtDREB2A, NtPYR1 and NtGLR3.4) determined by the formula Pfaffl. The transgene expression profile proved to be constant in transformed plants under normal condition and induced stress condition and the insertion of the gene OsGLR3.1 moderately affected the expression of other genes evaluated and became inconclusive this gene in response tolerance deficit water.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/12169
Publisher: Universidade Federal de Lavras
???metadata.dc.language???: por
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