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Título: Transformação de Stenocarpella maydis com os genes marcadores GFP e DsRed e patogenicidade dos transformados em sementes de milho
Título Alternativo: Transformation of Stenocarpella maydis with genes markers GFP and DsRed and pathogenicity of transformed into maize seeds
Autor(es): Siqueira, Carolina da Silva
Orientador: Machado, José da Cruz
Membro da banca: Figueira, Antonia dos Reis
Guimarães, Renato Mendes
Área de concentração: Patologia de Sementes
Assunto: Milho
Stenocarpella maydis
Transformação genética
Protoplastos
GFP
DsRed
Corn
Genetic transformation
Protoplasts
Data de Defesa: 29-Jul-2009
Data de publicação: 31-Jul-2014
Referência: SIQUEIRA, Carolina da Silva. Transformação de Stenocarpella maydis com os genes marcadores GFP e DsRed e patogenicidade dos transformados em sementes de milho. 2009. 53 p. Dissertação (Mestrado em Fitopatologia) - Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2009.
Resumo: Entre os principais fungos que se associam às sementes de milho encontra-se Stenocarpella maydis, agente causal de podridões do colmo e de espiga que acarreta perdas consideráveis em regiões produtoras desta cultura no Brasil. Na literatura, poucas são as informações sobre os mecanismos de infecção e da dinâmica de transmissibilidade deste fungo via sementes deste hospedeiro. Para estes tipos de estudos, uma ferramenta importante tem sido o uso de microrganismos transformados por meio de marcadores moleculares, como GFP e DsRed. Dessa forma, com a realização deste trabalho, os objetivos foram transformar o referido fungo e avaliar o seu comportamento em associação com sementes de milho. Para a transformação do fungo, o protocolo utilizado permitiu obter protoplastos íntegros e em concentração necessária. O plasmídeo utilizado foi multiplicado satisfatoriamente e a concentração do antibiótico utilizado foi aferida. O protocolo de transformação foi adaptado em alguns aspectos, revelando ser eficaz, com base em observações da fluorescência em microscópio de epifluorescência. O fungo manteve suas características morfológicas, quando comparado aos isolados originais, sem transformação, e sua infectividade em sementes de milho também não foi alterada. Pela técnica de PCR foi confirmada a presença dos genes nos isolados transformados. A inoculação de sementes com os transformantes não só confirmou a patogenicidade destes, como possibilitou a observação da colonização nas sementes.
One of the fungi which can associate to maize seeds is Stenocarpella maydis, causal agent of stalk and ear rot, which is responsible by considerable losses in producing regions of this crop in Brazil. From literature, there is little information on the mechanisms of infection and on the transmission dynamics of this fungus in relation to maize seeds. For this sort of investigation the transformation of the fungus by mean of molecular markers such as GFP and DsRed.has been an important tool. So, this work was carried out aiming the transformation of the fungus and assessing its behavior in maize seeds. For transformation, the protocol used provided a reasonable number of protoplasts, reaching a satisfactory concentration for the purpose of this study. The plasmid was successfully multiplied and the concentration of the antibiotic was adequate, as it is recommended for other cases. The protocol was therefore adjusted and proved to be efficacy as demonstrated by the fluorescence in the fluorescence microscope. The transformed isolates maintained their morphological characteristics when compared to the original isolates, and their infectivity in maize seeds was confirmed. By the PCR technique, it was possible to confirm the presence of genes in the transformed isolates. From the inoculation of seeds it was possible to confirm the pathogenicity of the transformed isolates as well as it was possible to observe their colonization in the infected seeds.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/1886
Publicador: UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
Idioma: pt_BR
Aparece nas coleções: DFP - Agronomia/Fitopatologia - Mestrado (Dissertações)

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