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Título: Diluidores e crioprotetores no resfriamento e congelamento do sêmen de piracanjuba ( Brycon orbignyanus)
Título Alternativo: Semen cool storage and cryopreservation of piracanjuba Brycon orbignyanus.
Autor(es): Maria, Alexandre Nizio
Orientador: Viveiros, Ana Tereza de Mendonça
Membro da banca: Freitas, Rilke Tadeu Fonseca de
Murgas, Luis David Solis
Figueiredo, Henrique César Pereira
Logato, Priscila Vieira Rosa
Área de concentração: Produção animal
Assunto: Aquicultura
Resfriamento
Criopreservação
Sêmen
Peixe
Piracanjuba
Cool storage
Cryopreservation
Semen
Fish
Piracanjuba
Data de Defesa: 23-Fev-2005
Data de publicação: 4-Ago-2014
Referência: MARIA, A. N. Diluidores e crioprotetores no resfriamento e congelamento do sêmen de piracanjuba (Brycon orbignyanus). 2005. 71 p. Dissertação (Mestrado em Zootecnia)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2005.
Resumo: O objetivo deste trabalho foi desenvolver um protocolo de preservação de sêmen do piracanjuba (Brycon orbignyanus) através dos processos de resfriamento a 4ºC e congelamento. Os trabalhos foram realizados na Estação de Piscicultura da Companhia Energética de Minas Gerais (CEMIG), Itutinga-MG. No experimento 1 foram avaliados diversos diluidores, crioprotetores (DMSO, metanol e metil glicol) e antibiótico (sulfato de gentamicina) no resfriamento do sêmen. No experimento 2, os diluidores que melhor mantiveram a motilidade espermática no experimento 1 foram acrescidos de 10% de crioprotetor (DMSO, metanol ou metil glicol) e 5% de gema de ovo de galinha e usados como meio diluidor para o congelamento de sêmen. O congelamento foi feito utilizando um botijão de vapor de nitrogênio líquido (Taylor-Warton, modelo CP 300, "dry shipper"). As amostras de sêmen foram descongeladas em banho-maria à 60ºC por 8 segundos. No experimento 3, avaliou-se a porcentagem de sobrevivência através do método de coloração diferencial e a capacidade de fertilização dos espermatozóides após o descongelamento. No Experimento 1, a solução de Saad (NaCl 200 mM; tris 30 mM) foi o diluidor que melhor manteve a motilidade espermática, proporcionando 80% de motilidade após 24 h de resfriamento, enquanto as amostras controle (não diluídas) apresentaram apenas 33%. A adição de crioprotetores nos diluidores não promoveu melhoria no meio de conservação durante o resfriamento, exceto nas amostras diluídas em NaCl 0,9% acrescidas de DMSO, as quais após 24 h, produziram uma maior taxa de motilidade espermática (77%) em relação às amostras diluídas apenas em NaCl 0,9% (60%). Entretanto, as amostras de sêmen diluídas em Saad e NaCl 200 mM sem crioprotetor, apresentaram taxa de motilidade semelhante as amostras diluídas em NaCl 0,9% acrescidas de DMSO, indicando não ser necessário o acréscimo de crioprotetores no processo de resfriamento quando as soluções de Saad ou NaCl 200 mM são usadas como diluidores. A adição de gentamicina não melhorou a taxa de motilidade espermática durante o resfriamento. As soluções NaCl 200 mM e Saad, acrescidas ou não de gentamicina, preservaram a motilidade espermática por um período de 7 dias de resfriamento, produzindo taxas de motilidade entre 37 e 40% quando diluídas numa proporção 1:9 (sêmen:diluidor). No Experimento 2, as amostras que apresentaram as maiores taxas de motilidade espermática após o descongelamento foram NaCl 0,9% + gema de ovo + metil glicol (66%); M III (glicose; citrato de sódio; EDTA; sulfato de gentamicina; NaHCO3); + gema de ovo + metil glicol (60%) e BTS (glicose; citrato de sódio; EDTA; sulfato de gentamicina; NaHCO3; KCl) + metil glicol (70%). No Experimento 3, a porcentagem de sobrevivência dos espermatozóides após o descongelamento foi semelhante a porcentagem de espermatozóides móveis. Após a fertilização realizada com o sêmen congelado nesses criodiluidores, verificou-se uma boa taxa de eclosão dos ovos (58, 40 e 66%, respectivamente), porém menor (P<0,05) que a taxa observada com o sêmen fresco (86%).
The aim of this study was to develop a protocol for semen storage of piracanjuba (Brycon orbignyanus) by cool storage at 4ºC and cryopreservation. The experiments were carried out at the Fish Culture unit of Hydrelectric Company of Minas Gerais, Itutinga-MG. In experiment 1, some extenders, cryoprotectors (DMSO, methanol ot methyl glycol) and antibiotic (gentamicin sulfat) were tested on cool storage of semen. In experiment 2, the extenders that maintained the highest motility rate of semen on experiment 1, were combined with 10% cryoprotector (DMSO, methanol and methyl glycol) and 5% egg yolk, and used as cryodiluent for semen cryopreservation. Semen was frozen in liquid nitrogen vapour (vessel Taylor-Warton, model CP 300, "dry shipper") and thawed at 60ºC water-bath for 8 seconds. In experiment 3, the hatching rate of frozen sperm were evaluated. In experiment 1, semen diluted in Saad solution (NaCl 200 mM; tris 30 mM) yielded the highest motility rate (80%) after 24 h of cooling. Control undiluted semen produced only 33% motility after the same period of cooling. There was no difference on motility of semen diluted in extender compared to samples diluted in extender plus cryoprotectors. The only exception was the combination of NaCl 0,9% plus DMSO that produced 77% motility, compared to 60% motility of samples diluted in NaCl 0.9% only. Semen diluted in Saad solution or NaCl 200 mM only produced motility rates similar to those samples diluted in NaCl 0,9% plus DMSO. This indicates that there is no need to add cryoprotectants to the cooling medium when Saad solution or NaCl 200 mM are used as extenders. When semen was stored for 7 days in NaCl 200 mM or Saad solution containing gentamicin, motility rates were similar to those samples stored in the same extender without gentamicin. In experiment 2, semen frozen in NaCl 0,9% + egg yolk + methyl glycol, M III (glucose; sodium citrate; EDTA; gentamicin sulfat; NaHCO3) + egg yolk + methyl glycol and; BTS (glucose; sodium citrate; EDTA; gentamicin sulfat; NaHCO3; KCl) + methyl glycol produced post-thawed motility rates above 60%. When those samples semen was used to fertilize fresh eggs, the hatching rates were between 40 and 66%, while control fresh semen produced 86% of hatching.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/2131
Publicador: UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
Idioma: pt_BR
Aparece nas coleções: DZO - Zootecnia - Mestrado (Dissertações)

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