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Título: População bacteriana, motilidade espermática e fertilidade de sêmen de piracanjuba Brycon orbignyanus, submetido ao resfriamento.
Título Alternativo: Bacterian population, sperm motility and fertility of piracanjuba semen Brycon orbignyanus (VALENCIENNES, 1849) under refrigeration.
Autor(es): Isaú, Ziara Aparecida
Orientador: Viveiros, Ana Tereza de Mendonça
Membro da banca: Freitas, Rilke Tadeu Fonseca de
Figueiredo, Henrique César Pereira
Godinho, Hugo Pereira
Área de concentração: Ciências Veterinárias
Assunto: Reproducao animal
Sêmen
Peixe
Resfriamento
Bactérias
Antibióticos
Brycon
Semen
Fish
Refrigerated
Bacteria
Antibiotic
Brycon
Data de Defesa: 31-Ago-2006
Data de publicação: 12-Ago-2014
Referência: ISAÚ, Z. A. População bacteriana, motilidade espermática e fertilidade de sêmen de piracanjuba Brycon orbignyanus (Valenciennes, 1849) submetido ao resfriamento. 2006. vi, 94 p. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2006
Resumo: A piracanjuba, Brycon orbignyanus, é uma espécie de peixe migratória, encontrada na bacia do rio Grande e ameaçada de extinção, que não se reproduz naturalmente em cativeiro, sendo necessária a realização de fertilização artificial. Os objetivos deste estudo foram aperfeiçoar as técnicas de resfriamento para sêmen de piracanjuba por meio da padronização do pH, uso de antibiótico e avaliar, quantitativa e qualitativamente, a presença de contaminantes bacterianos no sêmen dessa espécie. Inicialmente, foi avaliada a motilidade espermática de amostras de sêmen diluídas (1:10 v/v) em solução de Saad em diferentes pHs - 7,0; 7,6; 8,2; 8.8 - e comparados com amostras de sêmen não diluídas por 7 dias. No experimento seguinte, amostras de sêmen, diluídas em solução de Saad pH 7,6 mantidas entre 4-6°C, foram avaliadas a cada 48 horas quanto à motilidade espermática e ao crescimento bacteriano, pela inoculação de amostras em placas de Petri contendo ágar soja tripticaseína (TSA), durante 8 dias. Foram selecionadas colônias bacterianas a cada contagem de diferentes morfotipos macroscópicos, isoladas e submetidas a teste de triagem (Gram, catalase e oxidase), teste de sensibilidade in vitro (difusão de discos) a cinco antibióticos - penicilina, ampicilina, estreptomicina, gentamicina e lincomicina - e congeladas para identificação posterior. A partir do perfil de sensibilidade, o sulfato de gentamicina foi selecionado para adição em solução de Saad para diluição do sêmen. Foram escolhidas as concentrações de 0,01; 0,1; 0,5 e 1,0 mg/mL de gentamicina comparadas ao controle (0 mg/mL), avaliandose a motilidade espermática e o crescimento bacteriano no sêmen. Também foi testada a taxa de fertilização de ovócitos com sêmen diluído nessas concentrações. Observou-se que o sêmen diluído em solução de Saad pH 7,6 conservou a melhor taxa de motilidade espermática durante resfriamento. Foi observada, durante os experimentos, uma correlação negativa significativa (P<0,01) entre a motilidade e o crescimento bacteriano, demonstrando que a queda na motilidade foi correlacionada ao aumento no número de bactérias no sêmen durante o resfriamento. Houve uma interação significativa entre as concentrações de gentamicina e o período de resfriamento, tendo as maiores taxas de motilidade espermática no 6° dia de armazenamento sido observadas no sêmen diluído em soluções com concentração de gentamicina acima de 0,1 mg/mL. Esta foi a menor concentração capaz de inibir completamente a presença de bactérias no sêmen diluído e manter taxas de fertilização dos ovócitos acima de 80%. Para identificação, foram selecionadas 63 colônias de bactérias. Uma grande diversidade de espécies foi identificada, a maioria bacilos gram-negativos. Algumas espécies anteriormente observadas em muco de superfície de peixes e águas de cultivo, como as Aeromonas sp., um grande número de espécies da família Enterobacteriaceae, como Citrobacter freundii e Enterobacter sp., além de gram-positivas, como Bacillus sp., Staphylococcus sp. coagulase negativos e Enterococcus sp. O sêmen diluído em solução de Saad com acréscimo de gentamicina em concentração acima de 0,1 mg/mL demonstrou efeito inibitório desse protocolo de diluição sobre a presença de bactérias de potencial patogênico, confirmando a importância da utilização de um antibiótico de amplo espectro para resfriamento de sêmen dessa espécie.
Piracanjuba, Brycon orbignyanus, is a migratory fish species originated from the Grande River basin. Piracanjuba is currently an endangered species. As this species does not breed naturally in captivity, artificial fertilization is necessary. The aim of this study was to improve the protocols for piracanjuba semen refrigeration at 4-6° C by pH standardization and antibiotic utilization, and to assess, quantitative and qualitatively, the presence of bacterial contamination on the semen. Firstly, sperm motility was evaluated on samples of semen diluted (1:10 total volume) in Saad solution with the pH adjusted to different values - 7.0, 7.6, 8.2, 8.8 - for 7 days. Then, samples diluted in Saad solution pH 7.6 and stored at 4-6°C were daily evaluated for sperm motility, and every 48h, for bacterial contamination (CFU/mL) by inoculation on tryptcasein soy agar (TSA), for 8 days. Bacterial colonies of different morphotypes were selected at each counting step, for isolation, selection test (Gram, catalase and oxidase), in vitro sensibility test (antibiogram) with five antibiotics - penicillin, ampicillin, estreptomycin, gentamycin and lincomicin - and frozen for posterior identification. According to the sensibility test, gentamycin was selected, added to Saad solution and used as semen extender. Concentrations of 0 (control), 0.01, 0.1, 0.5 and 1.0 mg of gentamycin per mL of Saad solution were tested. Sperm motility and bacterial growth were evaluated. To check whether gentamycin would interfere with the fertilization process, semen diluted in Saad solution containing the same concentrations tested before, was used to fertilize oocytes. Semen diluted in Saad solution pH 7.6 produced the highest sperm motility during a 7-day refrigeration period. A negative correlation (P<0.01) was observed between sperm motility and bacterial growth, which indicates that the decrease in sperm motility was correlated with the increase in the number of bacteria present in the semen. There was a significant interaction between gentamycin concentrations and refrigeration time, with the highest sperm motility rates being observed after 6 days of storage when gentamycin was added at 0.1mg/mL. This was the lowest concentration able to inhibit bacterial growth in diluted semen and keep the fertilization rates above 80%. Sixty-three bacterial colonies were selected for identification. A large variety of bacterial species was observed and most of the species were rods and Gram negative. Some species commonly observed in mucus of fish surfaces and aquatic environments, such as Aeromonas sp. were also found. Furthermore, a large number of species from the Enterobacteriaceae family (e.g. Citrobacter freundii and Enterobacter sp.), Gram positives, such as Bacillus sp., Enterococcus sp., and coagulase negative Staphilococcus sp., were found. Gentamycin at 0.1 mg/mL produced an inhibitory effect on potentially pathogenic bacteria, which confirms the importance of broad-spectrum antibiotic utilization for the refrigeration of piracanjuba semen.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/2595
Publicador: UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
Idioma: pt_BR
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