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Título: Otimização da técnica de PCR para detecção de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli em sementes de feijão
Título Alternativo: Optimization of the PCR technique for detection of Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli in bean seeds
Autor(es): Silva, Franklin Cordeiro
Orientador: Souza, Ricardo Magela de
Membro da banca: Castro, Hilário Antônio de
Figueira, Antonia dos Reis
Área de concentração: Fitopatologia
Assunto: Feijão - Xanthomonas axonopodis
Feijão - Doenças e pragas
Feijão - Bacterioses
Reação em cadeia de polimerase
Data de Defesa: 31-Jul-2008
Data de publicação: 12-Ago-2014
Referência: SILVA, F. C. Otimização da técnica de PCR para detecção de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli em sementes de feijão. 2008. 49 p. Dissertação (Mestrado em Agronomia)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2008.
Resumo: O crestamento bacteriano comum, causado por Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap), é a principal bacteriose do feijoeiro no Brasil, sendo transmitida principalmente por sementes. O presente trabalho foi realizado com o objetivo de aperfeiçoar uma técnica para detecção de Xap em sementes de feijão, por meio da utilização de diferentes métodos de preparação do extrato para a detecão via PCR, além da detecção simultânea de Xap e Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff) nos extratos, utilizando a Bio-PCR. Após a inoculação das sementes de feijão, foram avaliados: extrato bruto, obtido diretamente das sementes, extrato concentrado em membrana milipore, extrato concentrado por centrifugação e extrato plaqueado em meio seletivo (Bio-PCR). Avaliou-se a presença de Xap e de Cff, em lotes comerciais de feijão provenientes de diversas regiões do Brasil, utilizando-se os mesmos procedimentos das sementes inoculadas. Para a otimização da técnica de PCR, foram utilizados os primers X4c e X4e. A partir do extrato bruto, do extrato concentrado por centrifugação e por membrana milipore, não foi possí­vel a detecção de Xap nas sementes de feijão artificialmente contaminadas nem nos 47 lotes comerciais de sementes/grãos de feijão. A técnica de Bio-PCR permitiu a detecção de Xap a partir de extratos de sementes de feijão artificialmente contaminadas e em 18 dos 47 comerciais. A técnica de detecção simultânea de Xap e Cff no mesmo gel não foi viável, por amplificar fragmentos de DNA tí­picos de Cff na amostra controle Xap. O meio de cultura semi-seletivo XCP1 sem antibióticos pode ser utilizado para a recuperação de colônias de Xap.
Common blight caused by Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap) is the main bacterial malady in Brazilian beans, being transmitted mainly by seeds. This present work aimed at improving a technique for the detection of Xap in bean seeds, by using different extract preparation methods for detection through via PCR, and the simultaneous detection of Xap and Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff) in the extracts by using a Bio-PCR. After inoculating the bean seeds an assessment was made of gross extract obtained directly from the seeds, extract concentrated in Millipore membrane, extract concentrated via centrifugation and plating of seed extracts on a semi-selective agar medium (Bio-PCR). The presence of Xap and Cff in commercial lots of beans from several regions of Brazil by using the same procedures as those for inoculated seeds was also assessed. For the optimization of the PCR technique primers X4c and X4e were used. Neither from the gross extract, the extract concentrated by centrifugation and by Millipore membrane detection of Xap in artificially contaminated bean seeds nor in the 47 commercial lots of bean seeds/grains was the detection of Xap possible. The Bio-PCR technique enabled for the detection of Xap from artificially contaminated bean seed extracts and in 18 of the 47 commercial lots. The technique for the simultaneous detection of Xap and Cff in the same gel was not viable due to the amplification of typical Cff DNA fragments in the control Xap sample. The semi-selective cultivation medium XCP1 without antibiotics can be used for the recovery of Xap colonies.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/2609
Publicador: UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
Idioma: pt_BR
Aparece nas coleções: DFP - Agronomia/Fitopatologia - Mestrado (Dissertações)

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