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Título: Resfriamento e criopreservação do sêmen de curimba Prochilodus lineatus (Valenciennes, 1836)
Título Alternativo: Semen cool storage and cryopreservation of curimba Prochilodus lineatus (VALENCIENNES, 1836)
Autor(es): Orfão, Laura Helena
Orientador: Viveiros, Ana Tereza de Mendonça
Membro da banca: Souza, José Camisão de
Pompeu, Paulo dos Santos
Filho, José Cleto da Silva
Área de concentração: Produção animal
Assunto: Sêmen
Peixe
Resfriamento
Criopreservação
Curimba
Prochilodus
Semen
Fish
Cool Storage
Cryopreservation
Curimba
Prochilodus
Data de Defesa: 5-Dez-2006
Data de publicação: 15-Ago-2014
Referência: ORFÃO, L. H. Resfriamento e criopreservação de sêmen de curimba Prochilodus lineatus (VALENCIENNES, 1836). 2006. 85 p. Dissertação (Mestrado em Zootecnia)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2006.
Resumo: O curimba (Prochilodus lineatus) é uma espécie de peixe nativa da bacia do rio Paraná. Esta espécie é comercialmente importante por ser fornecida como alimento para outras espécies, de interesses ecológico ou comercial, durante a larvicultura. Além disso, é fonte de proteína de alta qualidade para populações ribeirinhas e carentes. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um protocolo de preservação de sêmen do curimba por meio dos processos de resfriamento a 4ºC -6ºC e criopreservação. Os trabalhos foram realizados na Estação de Piscicultura da Companhia Energética de Minas Gerais (CEMIG), Itutinga, MG. Para o resfriamento, o sêmen foi diluído 1:10 (v/v sêmen: volume total) para avaliação dos dois grupos de soluções diluidoras. O grupo com soluções à base de cloreto de sódio foi composto por NaCl 0,9%, NaCl 1,2% e NaCl-tris. O outro grupo com soluções à base de glicose foi composto por glicose 5%, BTS 5% (glicose, citrato de sódio, EDTA, sulfato de gentamicina, NaHCO3, KCl) e M III 6% (glicose, citrato de sódio, EDTA, sulfato de gentamicina, NaHCO3). Uma alíquota do sêmen foi mantida sem diluição para servir de controle. A motilidade espermática foi subjetivamente avaliada após 0, 1, 2, 3, 4 e 5 dias de resfriamento a 4ºC-6ºC e a ativação do sêmen foi feita com solução de NaCl 0,29%.Para a criopreservação do sêmen foram realizados dois experimentos. No experimento 1, foram avaliados quatro diluidores (NaCl 0,9%, glicose 5%, BTS 5% e M III 6%), dois crioprotetores (dimetilsulfóxido-DMSO e metilglicol) e quatro ativadores (água destilada, NaCl 0,15%, NaCl 0,29% e NaHCO3). Para a criopreservação do sêmen, 3 palhetas de 0,5 mL foram congeladas em cada meio crioprotetor (1:10, v/v, sêmen: volume) em um botijão de vapor de nitrogênio líquido (Taylor-Warton, modelo CP 300, "dry shipper") a -170°C e depois armazenadas em nitrogênio líquido. A motilidade espermática foi avaliada depois do descongelamento em banho-maria a 60°C por 8 segundos e foi subjetivamente estimada após ativação com cada um dos ativadores testados (1:5, v/v, sêmen:ativador). No experimento 2, o sêmen foi diluído em glicose 5% e metilglicol, sendo testado, agora, o efeito dos volumes de palhetas (0,5 e 4 mL) e da temperatura de descongelamento (30ºC e 60ºC) no sêmen criopreservado. A motilidade espermática do sêmen resfriado e não diluído foi 4% depois de 2 dias de resfriamento. Após cinco dias de resfriamento a 4ºC-6ºC o sêmen de curimba diluído em BTS 5% e M III 6% apresentaram motilidades espermáticas de 50%. Estes resultados mostram que é necessário um diluidor para aumentar o tempo de armazenamento. Na criopreservação do sêmen, no experimento 1, houve uma interação entre diluidores, crioprotetores e ativadores. Todas as amostras de sêmen, criopreservadas no meio contendo NaCl 0,9% como diluidor, produziram baixa motilidade espermática, após o descongelamento, quando comparadas aos outros diluidores. Amostras criopreservadas em glicose 5%, combinadas com metilglicol, produziram altas taxas de motilidades espermáticas, em comparação com as amostras criopreservadas em glicose combinada com DMSO. Os quatros ativadores testados produziram motilidades semelhantes em todas as combinações diluidor-crioprotetor, exceto quando o BTS 5% foi usado como diluidor e a água destilada foi usada como ativador. Não houve diferença no sêmen criopreservado em palhetas de 0,5 e 4,0 mL ou no descongelamento a 30ºC ou 60ºC.
Curimba (Prochilodus lineatus) is a species of native fish of the Grande river. This species is commercially important for being supplied as food to other ecological or commercial species, of interests, during the fingerling production. Moreover, it is protein source of high quality for marginal and devoid populations. The objective of this work was to develop a protocol of semen preservation of curimba through cooling 4-6ºC and cryopreservation storage. This works was carried out at the Fish Culture Unit of Energy Company of Minas Gerais (CEMIG), Itutinga-MG. For chilling storage, semen was diluted (1:10, v/v, semen: total volume) in saline solutions (NaCl 0.9%, NaCl 1.2% or NaCl-tris) or in glucose-based solutions (glucose 5%, BTS 5% or M III 6%). BTS contains glucose, sodium citrate, EDTA, gentamycin sulfate, NaHCO3 and KCl, and M III contains the same chemical composition of BTS except KCl. One semen aliquot was kept undiluted and was used as control. All samples were stored in open 5-mL test tubes at 4-6°C and motility was evaluated after 0, 1, 2, 3, 4, 5 and 6 days of storage. Sperm motility was subjectively estimated after addition of activation medium (NaCl 0.29%). For semen cryopreservation, two experiments were carried. In experiment 1, eight freezing medium were prepared using a combination of four extenders (NaCl 0.9%, glucose 5%, BTS 5% and M III 6%) and two cryoprotectants (dimethyl sulphoxide - DMSO and methylglycol). Semen was diluted (1:10, v/v, semen: total volume) in each freezing medium, aspirated into 0.5-mL straws (n=3 per medium), transferred to a nitrogen vapor container (Taylor-Warton, CP 300) at -170°C and then stored in liquid nitrogen. Sperm motility was subjectively evaluated after thawing at 60°C-water bath for 8 s. To activate sperm motility, four activating medium (distilled water, NaCl 0.15%, NaCl 0.29% and NaHCO3) were tested. Then, to evaluate the effect of straw size (0.5 and 4.0 mL) and thawing temperature (30 and 60ºC), semen was frozen in glucose-methylglycol medium using the same method as described on experiment 1. Post-thaw sperm motility was subjectively estimated after activation with NaCl 0.29%. On chilling storage, motility of only 4% was observed on undiluted semen after 2 days at 4-6 °C. Curimba semen diluited in BTS 5% or in M III 6% maintained motility above 50 % for as long as 5 days at 4-6ºC. This results show that an extender is necessary to increase semen time storage. For cryopreservation, in experiment 1, there was an interaction among extenders, cryoprotectants and activation media. All samples cryopreserved in a medium containing NaCl 0.9% as extender, produced low post-thaw sperm motility, compared to the other extenders. Samples cryopreserved in glucose combined with methylglycol produced higher post-thaw sperm motility, compared to samples cryopreserved in glucose combined with DMSO. The four activating medium tested produced similar post-thaw motility in all extender-cryoprotectant combinations, except when BTS was used as extender and distilled water was used as activating medium. There was no difference on semen cryopreserved in 0.5- or 4.0-mL straw or thawed in 30° or in 60°C.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/2825
Publicador: UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
Idioma: pt_BR
Aparece nas coleções: DZO - Zootecnia - Mestrado (Dissertações)

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