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Título: Validação de genes de referência para RT-qPCR em tecido cardíaco de ratos submetidos à obesidade e ao diabetes
Autor : Oliveira, Marina Martins de
Lattes: http://lattes.cnpq.br/5591885352374700
Primeiro orientador: Sousa, Raimundo Vicente de
Segundo orientador: Peconick, Ana Paula
Primeiro membro da banca: Dorneles, Elaine Maria Seles
Segundo membro da banca: Valente, Fabrício Luciani
Terceiro membro da banca: Remedio, Rafael Neodini
Palavras-chave: Normalização
RT-qPCR
Algoritmo RefFinder
Gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH)
Gene POLR2A
Normalization
RefFinder algorithm
Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)
POLR2A gene
Data da publicação: 13-Ago-2018
Agência(s) de fomento: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Referência: OLIVEIRA, M. M. de. Validação de genes de referência para RT-qPCR em tecido cardíaco de ratos submetidos à obesidade e ao diabetes. 2018. 40 p. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias)–Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2018.
Resumo: O presente trabalho tem como objetivo identificar e validar genes de referência para RT-qPCR em tecido cardíaco de ratos da espécie Rattusnorvegicusalbinus, submetidos à obesidade associada ou não ao diabetes mellitus tipo 2. Para isso, as alterações metabólicas foram induzidas aos 42 dias de vida, sendo a eutanásia realizada no 70º dia. Os corações dos animais foram coletados e o ápice cardíaco foi destinado às técnicas moleculares para extração do RNA, realizada com TRIzol®. Os candidatos a genes de referência foram GAPDH, POLR2A, RPL32 e RPL4.A técnica da RT-qPCR foi feita em termociclador, sendo a eficiência dos iniciadores encontrada pelo software LinReg e a estabilidade da expressão dos genes de referência nas amostras analisada pelo algoritmo RefFinder. O gene alvo utilizado para verificar a diferença da expressão gênica dos candidatos a genes de referência foi o CMA1. Os resultados sugerem que os animais obesos apresentaram uma diminuição da expressão do gene CMA1 quando comparado com os dois genes de referência mais estáveis. O contrário ocorre quando o mesmo é comparado com os dois genes de referência menos estáveis. Não existe um gene de referência universal para todas as situações, o que requer uma validação sistemática para cada uma. A utilização de genes de referência não validados pode comprometer a expressão dos genes alvo, o que impediria o reflexo da situação real. Os genes GAPDH e POLR2A são os melhores para normalizar as reações com as amostras nas condições do presente experimento.
Abstract: The present work aims to identify and validate reference genes for RT-qPCR in cardiac tissue of rats of the Rattusnorvegicusalbinus species, submitted to obesity associated or not to type 2 diabetes mellitus. For this, the metabolic changes were induced at 42 days of life, with euthanasia being performed on the 70th day. The hearts of the animals were collected and the cardiac apex was assigned to the molecular techniques for RNA extraction, performed with TRIzol®. Candidates for reference genes were GAPDH, POLR2A, RPL32 and RPL4. The RT-qPCR technique was done in thermocycler, with the efficiency of the primers found by the LinReg software and the stability of the expression of the reference genes in the samples analyzed by the RefFinder algorithm. The target gene used to verify the difference in gene expression of candidates for reference genes was CMA1. The results suggest that obese animals showed a decrease in CMA1 gene expression when compared to the two most stable reference genes. The opposite occurs when it is compared to the two less stable reference genes. There is no universal reference gene for all situations, which requires systematic validation for each. The use of unvalidated reference genes may compromise the expression of the target genes, which would prevent the reflection of the actual situation. The GAPDH and POLR2A genes are best at normalizing the reactions with the samples under the conditions of the present experiment.
metadata.teses.dc.description: Arquivo retido, a pedido do autor(a), até agosto de 2019.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/29959
Publicador: Universidade Federal de Lavras
Idioma: por
Aparece nas coleções:DMV - Ciências Veterinárias - Mestrado (Dissertações)

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