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Title: Transformação de Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum com os genes marcadores GFP e DsRed
Other Titles: Transformation of Fusarium oxysporum f sp. vasinfectum with GFP and DsRed gene markers
???metadata.dc.creator???: Pedrozo, Rodrigo
???metadata.dc.contributor.advisor1???: Machado, José da Cruz
???metadata.dc.contributor.advisor-co???: Figueira, Antonia dos Reis
???metadata.dc.contributor.referee1???: Guimarães, Renato Mendes
???metadata.dc.description.concentration???: Fitopatologia
Keywords: Algodão
Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum
Transformação genética
Gene repórter
Green Fluorescent Protein (GFP)
Red Fluorescente Protein (DsRed)
Cotton
Genetic transformation
Report gene
???metadata.dc.date.submitted???: 27-Feb-2009
Issue Date: 21-Aug-2014
Citation: PEDROZO, R. Transformação de Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum com os genes marcadores GFP E DsRed. 2009. 44 p. Dissertação (Mestrado em Agronomia)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2009.
???metadata.dc.description.resumo???: Fusarium oxysporum f sp. vasinfectum, the casual agent of fusarium wilt disease of cotton, is frequent in most cotton-producing regions in Brazil. The fungus infects roots, colonizes the rhizomes and eventually blocks the vascular system of the pseudostems, leading to the plant collapse. The Green and Red Fluorescent Proteins (GFP and DsRed) emit green and red fluorescence respectively when excited by blue and green light, making them useful tools to study early pathogen infection and other aspects of interest in plant pathology. In this context the aim of this study was to transform Fusarium oxysporum f sp. vasinfectum isolates with those markers and to compare the transformants with the wild-types isolates. Two isolates, with different geographic origins in Brazil, were transformed with the GFP and DsRed derivative markers using hygromicin B as an indicative marker. The results showed that the transformed isolates did not differ from the wild-type isolates in relation to growth and morphological characteristics in vitro. Analyses in fluorescence microscope showed expression of the green and red fluorescent proteins in the fungal structures. Also, the presence of GFP and DsRed in the fungal isolates was confirmed by PCR using specific primers. In the pathogenicity tests it was observed that the virulence of the trnasformant isolates was maintained. From infected tissues of artificially inoculated plants of cotton the transformed isolates were re-isolated and they expressed both proteins markers in the fluorescence microscope.
Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum é o agente etiológico da fusariose, uma da principais doenças do algodoeiro nas condições brasileiras. Trata-se de uma doença cujos sintomas se iniciam com o amarelecimento e abscisão dos cotilédones e folhas, seguida por descoloração do sistema vascular, resultado da obstrução dos vasos do xilema, e posteriormente a murcha e morte das plantas infectadas. Para investigar o mecanismo da interação patógeno hospedeiro, neste trabalho fez-se a transformação desse fungo com dois genes que codificam proteínas fluorescentes, a GFP e a DsRed, que fluorescem quando excitadas a 558 e 395nm, respectivamente, usando apenas um dos genes em cada transformação. Todas as estruturas dos fungos transformados, tanto com o gene da GFP como com o da DsRed, apresentaram uma alta fluorescência quando examinadas ao microscópio, nos respectivos comprimentos de onda. Ambos apresentaram crescimento micelial típico, semelhante aos dos não transformados, com as mesmas características morfológicas in vitro, e a presença dos genes foi confirmada por PCR, utilizando primers específicos. Nos testes de inoculação artificial verificou-se que a patogenicidade dos isolados transformados não foi alterada e, quando reisolados pelos métodos convencionais, foram capazes de reproduzir a infecção e manter a fluorescência nas gerações seguintes.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/3105
Publisher: UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
???metadata.dc.language???: pt_BR
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