Please use this identifier to cite or link to this item: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/33139
metadata.teses.dc.title: Melhoria do desenvolvimento e da crioresistência de embriões bovinos produzidos in vitro com adição de moduladores da apoptose celular e da síntese lipídica
metadata.teses.dc.title.alternative: Improvement in development and cryoresistance of bovine embryos produced in vitro with addition of cell apoptosis and lipid synthesis modulators
metadata.teses.dc.creator: Viafara, Jesús Alfonso Sánchez
metadata.teses.dc.creator.Lattes: http://lattes.cnpq.br/7128866155145874
metadata.teses.dc.contributor.advisor1: Souza, José Camisão de
metadata.teses.dc.contributor.advisor-co1: Alves, Nadja Gomes
metadata.teses.dc.contributor.advisor-co2: Sales, Jose Nelio de Sousa
metadata.teses.dc.contributor.referee1: Alves, Nadja Gomes
metadata.teses.dc.contributor.referee2: Sudano, Mateus Jose
metadata.teses.dc.contributor.referee3: Milazzotto, Marcella Pecora
metadata.teses.dc.contributor.referee4: Ferreira, Marcos Brandão Dias
metadata.teses.dc.subject: Bovinos - Reprodução in vitro
Embriões - Crioresistência
Apoptose celular
Síntese lipídica
Bovines - In vitro reproduction
Embryos - cryoresistance
Cellular apoptosis
Lipid synthesis
metadata.teses.dc.date.issued: 1-Mar-1992
metadata.teses.dc.description.sponsorship: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
metadata.teses.dc.identifier.citation: VIAFARA, J. A. S. Melhoria do desenvolvimento e da crioresistência de embriões bovinos produzidos in vitro com adição de moduladores da apoptose celular e da síntese lipídica. 2019. 117 p. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2019.
metadata.teses.dc.description.resumo: A produção de embriões bovinos in vitro é deficiente devido a aspectos tais como as condições subótimas onde se desenvolvem, as quais induzem a apoptose conduzindo a uma baixa criotolerância. Objetivou-se modular a ativação da apoptose e a síntese lipídica via ativação dos receptores proliferadores para diminuir a apoptose celular e aumentar a criotolerância. No experimento 1 foram colocados aleatoriamente para cultivo embrionário (dia 1) presumíveis zigotos (grupo controle n=609; grupo DHA n=611; e grupo L-165041 n=608). A taxa de clivagem foi avaliada no dia 2 (D2) e a produção de blastocistos no dia 7 (D7). Para avaliar a taxa de apoptose pre vitrificação foram fixados embriões no D7 para o ensaio de TUNEL. O acumulo lipídico foi analisado pela técnica de Sudan Black em embriões fixados no D7. No experimento 2 foram vitrificados e desvitrificados (grupo controle n=98; grupo DHA= 76; L- 165041= 111) para avaliar a taxa de eclosão. Aqueles embriões que eclodiram foram congelados para analisar o perfil lipídico pela técnica de espectrometria de massa (MALDI- MS). A taxa de apoptose pós vitrificação foi analisada pelo ensaio de TUNEL. No experimento 1 a produção de blastocistos em D7 foi menor no grupo DHA quando comparada com a produção dos grupos controle e L-165041 (P < 0.05). Por outro lado, a proporção de células da MCI foi maior, e as taxas de apoptose total e da MCI foram menores no grupo L- 165041 quando comparadas às dos grupos controle e DHA (P < 0,05). Por sua vez, o grupo DHA teve a menor proporção de MCI e as maiores taxas de apoptose total e da MCI quando comparado com os grupos controle e L-165041 (P < 0,05). No grupo DHA, as mitocôndrias exibiam sinais de estresse celular, assim como várias células apresentaram vacuolização intensa. A taxa de apoptose total e da massa celular interna foi reduzida (P<0,05) no grupo L- 165041, quando comparada às dos grupos DHA e controle. No experimento 2 as taxas de eclosão das 36h às 72h após desvitrificação foram maiores (P < 0.05) no grupo L-165041 comparadas ás do grupo controle, e a partir das 48h com o grupo DHA. Foi encontrada uma abundancia relativa das fosfatidilcolina (PC) protonada (34:2) + H] + e PC oxidado [PC (36:1) + H] + no grupo L-165041 comparado com o grupo controle. O grupo DHA teve uma maior abundância relativa (P <0.05) da PC protonada (32:0) comparado com o grupo controle. Em conclusão, a adição de L-165041 no cultivo embrionário diminui a apoptose pré e pós vitrificação. O estudo indica que a adição de 1µM de L-165041 no meio de cultivo aumenta a proliferação celular pré vitrificação e diminui a apoptose pré e pós vitrificação, além de aumentar a criotolerância. Por outro lado, a adição de DHA diminui o desenvolvimento embrionário não sendo aconselhável seu uso na PIVE nas condições deste estudo.
metadata.teses.dc.description.abstract: The production of bovine embryos in vitro is deficient, due to aspects such as suboptimal conditions where they develop, which induces apoptosis, leading to low cryotolerance. The aim of this study was to modulate the activation of apoptosis and lipid synthesis through activation of proliferation receptors (PPARs) to diminish cell apoptosis and increase cryotolerance. In experiment 1, day 1 presumptive zygotes were allocated at random for embryo culture (control group n = 609, DHA group n = 611, and L-165041 (selective agonist of PPARD) group n = 608). The cleavage rate was evaluated on day 2 (D2) and blastocyst production on day 7 (D7). To evaluate the pre-vitrification apoptosis rate, embryos were fixed in D7 for TUNEL assay. Lipid accumulation was analyzed by the Sudan Black technique in embryos fixed in D7. In experiment 2, blastocysts were vitrified and devitrified (control group n = 98, DHA group = 76, L-165041 group = 111) to evaluate the eclosion rate. The embryos that ecloded were frozen to analyze the lipid profile by the mass spectrometry technique (MALDI-MS). The post-vitrification apoptosis rate was analyzed by TUNEL assay. In experiment 1, blastocyst production in D7 was less in the DHA group than production in the control and L-165041 groups (P < 0.05). However, the proportion of MCI cells was greater, and the total apoptosis and MCI rates were lower in the L-165041 group compared to the control and DHA groups (P < 0.05). The DHA group had a lower proportion of MCI and higher total apoptosis and MCI rates compared to the control and L-165041 groups (P < 0.05). In the DHA group, the mitochondria exhibited signs of cell stress, just as various cells exhibited intense vacuolization. The total apoptosis rate and inner cell mass was reduced (P<0.05) in the L-165041 group compared to the DHA and control group. In experiment 2, the eclosion rates from 36 h to 72 h after devitrification were greater (P < 0.05) in the L- 165041 group compared to the control group, and from 48 h on compared to the DHA group. A relative abundance of protonated phosphatidylcholine [PC (34:2) + H] + and oxidized PC [PC (36:1) + H] + in the L-165041 group was found compared to the control group. The DHA group had relative abundance (P <0.05) of protonated PC (32:0) compared to the control group. In conclusion, the addition of L-165041 in the embryonic culture decreases pre- and post-vitrification apoptosis. Our study indicates that the addition of 1 µM of L-165041 in the culture medium increases pre-vitrification cell proliferation and decreases pre- and postvitrification apoptosis, and also increases cryotolerance. In contrast, addition of DHA decreases embryonic development, and its use in in vitro production of bovine embryos under the conditions of this study is not recommended.
metadata.teses.dc.description: Arquivo retido, a pedido do autor, até março 2020.
metadata.teses.dc.identifier.uri: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/33139
metadata.teses.dc.publisher: Universidade Federal de Lavras
metadata.teses.dc.language: por
Appears in Collections:DMV - Ciências Veterinárias - Doutorado (Teses)

Files in This Item:
There are no files associated with this item.


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.