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metadata.artigo.dc.title: Sensibilidade do método de obtenção das células bacterianas e da técnica de PCR para detecção de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens em sementes de feijão
metadata.artigo.dc.title.alternative: Sensitivity of the method of obtaining bacterial cells and PCR for detection of Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens in bean seeds
metadata.artigo.dc.creator: Deuner, Carolina Cardoso
Souza, Ricardo Magela de
Zacaroni, Ana Beatriz
Figueira, Antonia dos Reis
Camera, Juliane Nicolodi
metadata.artigo.dc.subject: Detecção de bactérias
Inoculação artificial
Restrição hídrica
Sementes - Fitobactérias
Detection of bacteria
Artificial inoculation
Water restriction
Seeds - Phytobacteria
metadata.artigo.dc.publisher: Grupo Paulista de Fitopatologia
metadata.artigo.dc.date.issued: 2012
metadata.artigo.dc.identifier.citation: DEUNER, C. C. et al. Sensibilidade do método de obtenção das células bacterianas e da técnica de PCR para detecção de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens em sementes de feijão. Summa Phytopathologica, Botucatu, v. 38, n. 1, p. 48-53, 2012.
metadata.artigo.dc.description.resumo: Atualmente, existe a necessidade de se desenvolver métodos sensíveis, baratos, reproduzíveis e rápidos para a detecção de fitobactérias em sementes. O objetivo deste trabalho foi otimizar um método de obtenção das células bacterianas e a técnica de PCR para detecção de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff), em sementes de feijão. Foi utilizado o primer CffFOR2-REV4, desenhado a partir do fragmento amplificado via PCR baseado na seqüência repetitiva (Rep-PCR). Avaliaram-se também quatro métodos de preparação dos extratos de sementes de feijão para a obtenção células de Cff : 1) extrato bruto de sementes; 2 ) extrato concentra do por filtração em membra na milipore (0,22Mu de diâmetro) e ressuspensão em água; 3) extrato concentrado por centrifugação a 10 .00 0 xg por 15 minutos no volume de 20 ou de 80 mL e 4) Bio-PCR. Dentre esses métodos, tanto a Bio-PCR quanto a concentração do extrato por centrifugação, seja no volume de 20 ou de 80 mL, possibilitaram amplificar o segmento de DNA de 306 pb, característico de Cff. Essas duas técnicas, além de detectar a bactéria, apresentam alta sensibilidade, detectando até 1 semente inoculada artificialmente artificialmente com Cff em 999 sementes sadi as. Analisaram-se dezessete lotes comerciais de sementes de feijão pelo método de concentração de extrato por centrifugação, sendo qu e em doze detectou-se a bactéria Cff, observado pela presença de bandas com 306 pb. Portanto, foi possível otimizar um método de obtenção das células bacterianas e técnica de PCR para detecção de Cff em sementes de feijão, que seja sensível, reproduzível e de fácil execução, que poderá ser utilizado rotineiramente em laboratórios de análises de sementes.
metadata.artigo.dc.description.abstract: Currently, there is a need to develop sensitive methods, inexpensive, reproducible and rapid detection of phytobacteria seeds. The objective of this study was to optimize a method for obtaining bacterial cells and the PCR technique to detect Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff), in bean seeds using PCR. It was used one pairs of primers CffFOR2-REV4, designed from an PCR amplified fragment of the conserved repetitive sequence (Rep-PCR). The primer pair CffFOR2-REV4 was selected in this study, because demonstrated higher reproducibility and efficacy in the detection of Cff strains in bean seeds. Four methods were also evaluated in the seed extract preparation for PCR: 1) rough seed extract; 2) millipore membrane filter (0.22Mu diameter) concentrated seed extract and subsequently ressuspended in water; 3) centrifuge concentrated seed extract 10.000 xg for 15 minutes for 20 and 80 mL; 4) Bio-PCR. Among those methods, either Bio-PCR or centrifuge concentrated extract, in a total 20 or 80 mL suspension volume, produced a 306bp DNA fragment, diagnostic for Cff. Those two techniques detected the bacterium and presented high sensitivity, detecting up to 1 Cff physiological conditioning artificially contaminated seed in a total 999 healthy ones. A total of seventeen commercial bean seed lots were analyzed by the method of concentration of the extract by centrifugation, and twelve detected in the bacterium Cff, observed by the presence of bands with 306 bp. Therefore, it was possible to optimize a method of obtaining the bacterial cells and PCR for detection of Cff in bean seeds, that is sensitive, reproducible and easy to perform, which can be used routinely in laboratories for seed.
metadata.artigo.dc.identifier.uri: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/41981
metadata.artigo.dc.language: pt_BR
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