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Título: Embriogênese somática e transformação genética em dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.)
Autor(es): Pádua, Marlúcia Souza
Orientador: Paiva, Luciano Vilela
Coorientador(es): Stein, Vanessa Cristina
Mendonça, Evânia Galvão
Membro da banca: Carneiro, Andrea
Pio, Leila
Área de concentração: Biologia Molecular
Assunto: Dendê
Cultura de tecidos
Embriogênese somática
Enraizamento
Variação somaclonal
Gene gfp
Agrobacterium rhizogenes
Oil palm
Tissue culture
Somatic embryogenesis
Rooting
Somaclona variation
Gfp gene
Data de Defesa: 27-Mar-2015
Data de publicação: 2015
Agência de Fomento: Fundação de Amparo à Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG)
Referência: PÁDUA, M. S. Embriogênese somática e transformação genética em dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.). 2015. 135 p. Tese (Doutorado em Biotecnologia Vegetal) - Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2015.
Resumo: Oil palm is grown mainly in the Brazil northern region and has great economic importance due to high production of oil per fruit, which is applied in food industry, cosmetic, pharmaceutical and biofuels. However, oil palm cultivation expansion is limited by morphological and anatomical characteristic, has only an apical meristem. Biotechnological techniques, such as tissue culture and genetic transformation can provide seedlings and culture expansion to other regions of Brazil. The aim of this work was to study the somatic embryogenesis and develop a Agrobacterium rhizogenesgenetic transformation protocol for oil palm. Somatic embryogenesis process was analyzed by anatomical and ultrastructural parameters. The regenerated plants were rooted with growth regulators IAA (indole acetic acid) and IBA (indole butyric acid). Plants regenerated via somatic embryogenesis in vitro were analyzed for genetic stability by flow cytometry. For genetic transformation protocol, plants germinated in vitro, 120 days old, were placed in contact with the Agrobacterium rhizogenes strain MSU440containing pEZR (H)-LN plasmid with gfp gene. Two infection methods were evaluated, base cut and vacuum infiltration. Calluses with beige color showed embryogenic characteristics and were multiplied in MM culture medium until the eighth month and maintained the embryogenic characteristics. After this period calluses developed no embryogenic regions. In culture medium MCB was possible to develop somatic embryos and in culture medium MG was observed embryogenic stages, somatic embryos germination. Subsequently, seedlings were rooted in vitro, using MG culture medium and successfully acclimatized. Growth regulator IBA, at a concentration of 15 uM, showed higher percentage of rooting (87%). Genetic stability analysis of oil palm plants by flow cytometry showed an increase of 0.2 pg of DNA in 35 of 50 plants grown in vitro. vacuum infiltration method was effective in plant roots genetic transformation (41%) compared with infection cutting method.
O dendezeiro é cultivado, principalmente, na região norte do país. Tem grande importância econômica, devido à alta produção de óleo, que é aplicado em várias áreas da indústria alimentícia, cosmética, farmacêutica e de biocombustíveis. Porém, a expansão do cultivo do dendezeiro é limitada pela característica morfoanatômica da espécie, que tem um meristema apical. As técnicas biotecnológicas, como a cultura de tecidos e a transformação genética, podem auxiliar no fornecimento de mudas e na expansão da cultura para outras regiões do Brasil. Este trabalho foi realizado com o objetivo de estudar a embriogênese somática e obter um protocolo de transformação genética via Agrobacterium rhizogenes para dendezeiro. O processo de embriogênese somática foi avaliado por parâmetros anatômicos e ultraestruturais. As plantas regeneradas foram testadas quanto ao enraizamento com os reguladores de crescimento AIA (ácido indol acético) e o AIB (ácido indol butírico). As plantas regeneradas in vitro via embriogênese somática foram analisadas quanto à estabilidade genética, por meio de citometria de fluxo. Para obter um protocolo de transformação genética, as plantas oriundas de germinação in vitro aos 120 dias foram colocadas em contato com a Agrobacterium rhizogenes cepa MSU440 contendo o plasmídeo pEZR (H)-LN, que tem o gene gfp. Foram avaliados dois métodos de infecção, corte na base e infiltração a vácuo. Os resultados do estudo da embriogênese somática demonstraram que os calos com coloração bege apresentaram características embriogênicas e foram multiplicados em meio de cultura MM até o oitavo mês, e mantiveram as características embriogênicas. Depois desse período, regiões não embriogênicas começaram a se desenvolver. Foi possível desenvolver embriões somáticos no meio de cultura MCB e no meio de cultivo MG foram observados os estádios embriogênicos, a germinação dos embriões somáticos e, posteriormente, as plantas enraizadas in vitro, no meio de cultura MG, foram aclimatizadas com sucesso. O regulador de crescimento AIB, na concentração de 15 µM, proporcionou maior porcentagem de enraizamento (87%). A análise da estabilidade genética das plantas de dendezeiro, via citometria de fluxo, demonstrou um aumento de 0,2 pg de DNA em 35 das 50 plantas obtidas in vitro via embriogênese somática. O método de infiltração a vácuo foi eficiente na transformação genética das raízes das plantas (41%), em relação ao método de infecção por corte na base.
Informações adicionais: Tese apresentada à Universidade Federal de Lavras, como parte das exigências do Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia Vegetal, área de concentração em Biologia Molecular, para a obtenção do título de “Doutor”.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/5381
Publicador: UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
Idioma: pt_BR
Aparece nas coleções: PPBV - Biotecnologia Vegetal - Doutorado (Teses)

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