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Título: Avaliação de sistema de remoção de gene marcador de seleção por recombinação sítio específica em Passiflora spp., embriogênese somática e organogênese direta em Saccharum officinarum L.
Título(s) alternativo(s): Evaluation of selectable marker gene removal system in Passiflora edulis spp, somatic embriogenesis and direct organogenesis in Saccharum officinarum L.
Autor : Almeida, Rodrigo de Oliveira
Primeiro orientador: Souza Junior, Manoel Teixeira
Primeiro membro da banca: Molinari, Hugo Bruno Correa
Bordallo, Patrícia do Nascimento
Área de concentração: Biotecnologia Vegetal
Palavras-chave: Tecnologia marker-free
Maracujá
Embriogênese somática
Organogênese direta
Cana-de-açúcar
Marker free technology
Passion fruit
Somatic embryogenesis
Direct organogenesis
Sugarcane
Agronomia
Data da publicação: 4-Ago-2014
Referência: ALMEIDA, R. de O. Avaliação de sistema de remoção de gene marcador de seleção por recombinação sítio específica em Passiflora edulis spp, embriogênese somática e organogênese direta em Saccharum officinarum L.. 2011. 81 p. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia Vegetal)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2011.
Resumo: The current study was aimed to achieve two main objectives: to validate the use of the pRCNG vector in the production of marker free genetic modified (GM) passion fruit; and to evaluate the response of three Brazilian sugarcane cultivars to the induction of embryogenesis and organogenesis. In the experiments for pRCNG validation, hypocotyls segments collected from passion fruit plantlets were submitted to transformation by three different Agrobacterium strains. Problems with long delay in plant regeneration as well as with the selection medium let to a very small transformation efficiency, what jeopardized the evaluation of the efficiency of removal of the marker gene by site-specific recombination. In the experiments on embryogenesis and organogenesis, leaf segments from cultivars RB867515, RB855156 and RB72454 were used as initial explants. Three 2,4-D concentration, three incubation times, three subculture after 45 days of induction and three regeneration times were evaluated for embryogenesis induction; while different concentration and combination of NAA, Kin and BAP, and four incubation times were evaluated for direct organogenesis. The highest rates in embryogenesis induction were obtained using three mg.L-1 of 2,4-D, 30 days of incubation on induction medium, two subculture and 30 days of incubation on regeneration medium; while in direct organogenesis the best results were obtained after 45 days of induction with NAA and Kin, independent of concentration.
O presente trabalho visou avaliar o uso do vetor pRCNG na produção de plantas livres de marcadores de seleção, e também aperfeiçoar o protocolo de cultura de tecido para cultivares brasileiras de cana-de-açúcar. No experimento de validação do vetor pRCNG, segmentos de hipocótilo de maracujazeiros foram transformados via Agrobacterium. Análise de PCR foi realizada, constatando uma eficiência de transformação foi de 0,33%. Com este resultado, experimentos adicionais são necessários para finalizar a validação deste vetor e da tecnologia marker free. No experimento com cultura de tecido de cana-de-açúcar, foram utilizados explantes foliares das cultivares RB867515, RB855156 e RB72454. O ensaio de embriogênese somática consistiu em avaliar três concentrações de 2,4-D, três tempos de incubação, três subcultivos após 45 dias de indução e três tempos de regeneração. O ensaio de organogênese direta consistiu em avaliar o uso de diferentes concentrações e combinações de ANA, Kin e BAP, e quatro tempos de incubação. Melhores resultados no ensaio de embriogênese somática foram obtidos utilizando 3 mg.L-1 de 2,4-D, 30 dias em meio de indução, dois subcultivos e 30 dias em meio de regeneração para a cultivar RB867515. Melhores resultados no ensaio de organogênese direta foram obtidos com 45 dias de incubação com combinações de ANA e Kin para a cultivar RB855156, independente de suas concentrações.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/2143
Publicador: UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
Idioma: pt_BR
Aparece nas coleções:PPBV - Biotecnologia Vegetal - Mestrado (Dissertações)



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