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dc.creatorSantos, Yasmim Dutra-
dc.date.accessioned2018-04-17T13:18:40Z-
dc.date.available2018-04-17T13:18:40Z-
dc.date.issued2018-04-16-
dc.date.submitted2018-02-15-
dc.identifier.citationSANTOS, Y. D. Avaliação de marcas epigenéticas com a análise da expressão gênica de rDNA 45S em Urochloa ruziziensis, Urochloa brizantha e seu híbrido. 2018. 52 p. Dissertação (Mestrado em Genética e Melhoramento de Plantas)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2018.pt_BR
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/29048-
dc.description.abstractThe genus Urochloa P. Beauv. (including Brachiaria (Grin.) Griseb.) has a prominent role in the Brazilian agricultural scenario, being composed of species with different levels of ploidy and reproduction’s types. Studies on the genomic relationship within this genus are rare, as the researches involving epigenetic marks, directly involved with the genome organization. The aim of this work was to identify the pattern of cytosine methylation (5-mCyt) related to gene silencing and the dimethylation of lysine 9 in histone H3 (H3K9me2), associated with the heterochromatic structure, in the different conformations of the 45S rDNA sites, in the interphase nuclei and to associate these results with the analysis of the gene expression in Urochloa ruziziensis (genome B 2 B 2 B 2 B 2 ), Urochloa brizantha cv. Marandu (genome BBB 1 B 1 ) and its interspecific hybrid – H1863 (genome BB 1 B 2 B 2 ). Immunostaining techniques were performed in combination with FISH (fluorescence in situ hybridization) for the localization of the 45S rDNA sites. The slides were made with meristematic cells obtained from the root tips fixed in Carnoy (ethanol:acetic acid, 3:1 v/v). The indirect immunodetection was performed with the primary antibodies anti-H3K9me2 mouse monoclonal and anti-5-methyl cytosine mouse monoclonal. The detection was done using secondary antibodies mouse polyclonal TRITC-conjugated. FISH Technique was performed sequentially on immunostaining using rDNA probes obtained from Triticum aestivum L. From the combination of these two techniques it was possible to perceive a direct relation between the epigenetic marks and the different conformations of the nucleolar organizing regions (NORs). It was noticed predominantly intra and perinucleolar sites, which were mostly hypomethylated and/or hyper/hypomethylated, decondensed or partially condensed. Gene expression analysis was performed qualitatively through conventional PCR using complementary DNA (cDNA) and it was confirmed by the RT-qPCR technique, using primers designed for the ITS-1 region of U. brizantha and U. ruziziensis. The molecular analyzes showed differential expression between the 45S rDNA sites of the different genomes within the genome of hybrid 1863, characterizing a scenario of nucleolar dominance, in which happens the preferential expression of the 45S rDNA genes inherited from U. Brizantha, while the sites from U. ruziziensis are silenced through epigenetic mechanisms. These results allowed to infer that those sites that were hypermethylated in cytosine and H3k9me2 marks were inherited from U. ruziziensis, whereas the portion of rDNA characterized by hypomethylation of cytosine and H3k9me2 was originated from U. brizantha.pt_BR
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)pt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Lavraspt_BR
dc.rightsrestrictAccesspt_BR
dc.subjectMarcas epigenéticaspt_BR
dc.subjectDominância nucleolarpt_BR
dc.subjectCitosinas - Metilaçãopt_BR
dc.subjectEpigenetic markspt_BR
dc.subjectNucleolar dominancept_BR
dc.subjectCytosines - Methylationpt_BR
dc.titleAvaliação de marcas epigenéticas com a análise da expressão gênica de rDNA 45S em Urochloa ruziziensis, Urochloa brizantha e seu híbridopt_BR
dc.title.alternativeAssessment of epigenetic marks with gene expression analysis of 45S rDNA in Urochloa ruziziensis, Urochloa brizantha and its hybridpt_BR
dc.typedissertaçãopt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento de Plantaspt_BR
dc.publisher.initialsUFLApt_BR
dc.publisher.countrybrasilpt_BR
dc.contributor.advisor1Techio, Vânia Helena-
dc.contributor.advisor-co1Pereira, Welison Andrade-
dc.contributor.referee1Bonato, Andrea Beatriz Mendes-
dc.contributor.referee2Chalfun Junior, Antonio-
dc.contributor.referee3Pereira, Welison Andrade-
dc.description.resumoO gênero Urochloa P. Beauv. (incluindo Brachiaria (Trin.) Griseb.) apresenta um papel de destaque no cenário agropecuário brasileiro sendo composto por espécies com diferentes níveis de ploidia e modo de reprodução. Estudos sobre a relação genômica dentro desse gênero são escassos, assim como os estudos envolvendo marcas epigenéticas, diretamente envolvidas com a organização do genoma. O objetivo deste trabalho foi identificar o padrão da metilação nas citosinas (5-mCyt), relacionada ao silenciamento gênico, e da dimetilação da lisina 9 na histona H3 (H3K9me2), associada a estrutura heterocromática, nas diferentes conformações dos sítios de rDNA 45S, nos núcleos interfásicos e associar esses resultados com a análise da expressão gênica em Urochloa ruziziensis (genoma B 2 B 2 B 2 B 2 ), Urochloa brizantha cv. Marandu (genoma BBB 1 B 1 ) e respectivo híbrido interespecífico- H1863 (genoma BB 1 B 2 B 2 ). As técnicas de imunomarcação foram realizadas em combinação com a FISH (hibridização in situ fluorescente) para a localização dos sítios de rDNA 45S. As lâminas foram feitas com células meristemáticas, obtidas de pontas de raízes fixadas em Carnoy (etanol:ácido acético, 3:1). A imunodetecção indireta foi realizada com os anticorpos primários anti-H3K9me2 mouse monoclonal e anti-5-metil-citosina mouse monoclonal. Estes foram detectados com anticorpo secundário mouse policlonal TRITC-conjugado. A FISH foi realizada logo após à imunomarcação, utilizando sondas de rDNA obtidas de Triticum aestivum L.. A partir da combinação destas duas técnicas pôde-se perceber uma relação direta entre as marcas epigenéticas e as diferentes conformações das regiões organizadoras do nucléolo (RONs). Foram observados predominantemente sítios intra e perinucleolares que, em sua maioria, estavam hipometilados e/ou hiper/hipometilados, descondensados ou parcialmente condensados. Análise da expressão gênica foi realizada de forma qualitativa através da PCR convencional utilizando DNA complementar (cDNA) e confirmada por meio da técnica RT-qPCR, utilizando primers desenhados para a região ITS-1 de U. brizantha e U. ruziziensis. As análises moleculares mostraram uma expressão diferencial entre os sítios de rDNA 45S dos diferentes genitores dentro do genoma do híbrido 1863, caracterizando um cenário de dominância nucleolar, onde ocorre a expressão preferencial do genes de rDNA 45S herdados de U. brizantha, enquanto os sítios provenientes de U. ruziziensis são silenciados através de mecanismos epigenéticos. Estes resultados permitiram inferir que os sítios que se encontravam hipermetilados na citosina e H3k9m2, foram herdados de U. ruziziensis, enquanto que a porção de rDNA caracterizada pela hipometilação da citosina e da H3k9me2 é originada de U. brizantha.pt_BR
dc.publisher.departmentDepartamento de Biologiapt_BR
dc.subject.cnpqMelhoramento Vegetalpt_BR
Aparece nas coleções:Genética e Melhoramento de Plantas - Mestrado (Dissertações)



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