MATHEUS HERNANDES LEIRA SUSCEPTIBILIDADE DE SERRASALMINÍDEOS E SEUS HÍBRIDOS A PARASITOS EM SISTEMA DE RECIRCULAÇÃO INDOOR E DE PEIXES EM POLICULTIVO A BACTÉRIAS LAVRAS - MG 2016 MATHEUS HERNANDES LEIRA SUSCEPTIBILIDADE DE SERRASALMINÍDEOS E SEUS HÍBRIDOS A PARASITOS EM SISTEMA DE RECIRCULAÇÃO INDOOR E DE PEIXES EM POLICULTIVO A BACTÉRIAS Tese apresentada à Universidade Federal de Lavras, como parte das exigências do Programa de Pós- Graduação em Ciências Veterinárias, área de concentração em Genética, Reprodução e Sanidade em Animais Aquáticos, para a obtenção do título de Doutor. Orientador Dr. Rilke Tadeu Fonseca de Freitas Coorientadora Dra. Adriana Mello Garcia LAVRAS – MG 2015 Ficha catalográfica elaborada pelo Sistema de Geração de Ficha Catalográfica da Biblioteca Universitária da UFLA, com dados informados pelo(a) próprio(a) autor(a). Leira, Matheus Hernandes. Susceptibilidade de serrasalminídeos e seus híbridos a parasitos em sistema de recirculação indoor e de peixes em policultivo a bactérias / Matheus Hernandes Leira. – Lavras : UFLA, 2016. 98 p. : il. Tese(doutorado)–Universidade Federal de Lavras, 2015. Orientador: Rilke Tadeu Fonseca de Freitas. Bibliografia. 1. Sanidade de Animais Aquáticos. 2. Peixes Nativos. 3. Doença de peixes. 4. Pacu. 5. Tambaqui. I. Universidade Federal de Lavras. II. Título. MATHEUS HERNANDES LEIRA SUSCEPTIBILIDADE DE SERRASALMINÍDEOS E SEUS HÍBRIDOS A PARASITOS EM SISTEMA DE RECIRCULAÇÃO INDOOR E DE PEIXES EM POLICULTIVO A BACTÉRIAS Tese apresentada à Universidade Federal de Lavras, como parte das exigências do Programa de Pós- Graduação em Ciências Veterinárias, área de concentração em Ciências Veterinárias, para a obtenção do título de Doutor. APROVADA em 14 de dezembro de 2015. Dra. Adriana Mello Garcia UFLA Dra. Aline Assis Lago UFLA Dra. Marinez Moraes de Oliveira UFLA Dra. Ariane Flavia do Nascimento UNIFENAS Dr. Rilke Tadeu Fonseca de Freitas Orientador LAVRAS - MG 2015 Aos meus avós Jose Hernandez e Hermínia Lamonato Hernandez À minha mãe, Zelma Hernandez, meus irmãos, Arthur e Ayla DEDICO AGRADECIMENTOS A Deus pelo dom da vida e São Francisco de Assis por ter mostrado o caminhar junto aos animais, razão por ter me formado em Medicina Veterinária. À Universidade Federal de Lavras (UFLA) e ao Departamento de Medicina Veterinária (DMV), pela oportunidade concedida para a realização do doutorado. Ao professor Rilke Tadeu Fonseca de Freitas, pela orientação, apoio, paciência, conselhos e ensinamentos durante o doutorado. À professora Adriana Mello Garcia pela coorientação, dedicação e ensinamentos, conselhos, amizade, companheirismo e por ter - me acolhido no momento de maior necessidade, minha eterna gratidão. Ao professor Marcio Gilberto Zangeronimo, coordenador do Programa em Ciências Veterinárias, pela paciência e ensinamentos. Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico – CNPq, (Processo: 473549/2012-3) pela concessão da bolsa de estudos. Ao professor Ricardo Massato Takemoto, pela identificação dos parasitas e grande incentivo na pesquisa. À Aline Assis Lago e ao Adriano Carvalho Costa pelo ajuda, apoio, paciência e muita compreensão com as analises estatísticas. Ao técnico do setor de piscicultura, Eleci Pereira, pelos ensinamentos, conselhos e farras juntos e à técnica Dirceia Costa por sempre estar junto no laboratório nos momentos de necessidade. Aos amigos e companheiros de Pós-Graduação, Aline Assis Lago, Antonio Carlos, Carlos Cicinato, Hortência Aparecida Botelho, Marinez Moraes, Ulisses Nascimento, Luis Felipe, Tatiana Abreu, Adriano Carvalho, Mirian Silva Braz, Fábio Raphael Bruhn, Roseane Oliveira, Rafaela Bergmann, Jorge Henrique Vilela, Diego, Renan pela amizade e apoio durante o curso. Aos Professores que transmitiram seus conhecimentos e se tornaram grandes amigos, Paulo Pompeu, Priscila Vieira e Rosa, Raimundo Vicente, Marcio Zangeronimo, Geraldo Marcio, Maria Emilia, Edison J. Fassani, Jose Antonio Viana (UFV), Tânia V. Cavalcante (UFPI), Gerson Fausto (UFT), Kenia Rodrigues (UFT), Francisca Elda F. Dias (UFT), Stanley Mulford (in memoriam), Virginia Teófilo (UNIFENAS). Aos amigos da graduação, Eric Ribeiro, Marcelo Tanaka, Nayara, Jady, Amanda, Pedro, João Luis, Lucas Spósito (Goma), Mariano Marcilio, Henrique (Pirdido), Caio P. Martins (Pé de Cueio), Felipe Gabarra, Andre (Smigol), Gustavo Felisberto, Jose Reis, Edgar pelo companheirismo e amizade. Aos amigos violeiros, Luis Faria, Patrick da viola, Marcelo, Mauricio Viola, Wendel, Liu (in memoriam) e Zico (in memoriam). Aos primos, Gabriel e Rafael Paulino da Costa, à sua Mãe Marisa, à sua avó dona Neire e ao seu avô, o grande Lulu (in memoriam), por serem grandes companheiros em minha vida, mesmo que distantes fisicamente, sempre presentes no coração. À Marilu Martins Gioso, Calil Jose Miguel, Vanessa Franzo, Fabiana Caldara, Aline de Assis Lago, Andre Augusto R. Zumas, Carolina Gomes, Ana Paula Salvador, Maria Conceição V. Lacerda e Andreia Castro que sempre me apoiaram na luta por esta conquista. Ao Reitor da "UNIFENAS" Edson Antonio Vellano (in memoriam) por grande incentivo no passado. Ao mantenedor da "FACICA" , Dilermando Rabelo, por toda confiança depositada em mim. Aos amigos da República Frei Caneco que me receberam de braços abertos, muito obrigado, enfim a Frei não é uma república e, sim, uma grande família, tendo como mãe a Rosa Helena Ramos. À minha cachorra Pinga, inseparável amiga fiel e legal. http://lattes.cnpq.br/5085760915174932 Aos amigos inocentes da Rua Nair Verônica, onde foram realizadas as melhores festas. A todos os meus familiares, Amigos, Colegas, Parceiros, Amores, Amantes pelo apoio. E a todos que contribuíram para a realização desta pesquisa. “Feliz aquele que transfere o que sabe e aprende o que ensina.” (Cora Coralina) "Atiraram tanta pedra em meu caminho Que com elas construí o meu altar A lei divina manda só fazer o bem Pros inimigos no altar eu vou rezar Para aqueles que só sabem jogar pedras Como resposta peço a Deus pra perdoar" Jose Dias Nunes (Tião Carreiro) RESUMO GERAL O aumento da suscetibilidade às enfermidades parasitárias, bacteriológicas e infecciosas tem causado grandes prejuízos na piscicultura. A ocorrência de parasitas e bactérias é uma das maiores causas de perdas nas pisciculturas industrial e esportiva e, ainda, temos o fato de que o ambiente aquático facilita a reprodução, dispersão e sobrevivência dos agentes patogênicos. Pesquisas na área de sanidade em peixes são escassas, principalmente, quando relacionadas a espécies nativas. O aumento da aquicultura continental despertou maior interesse de produtores e pesquisadores quanto aos aspectos sanitários, visando ao aprimoramento das técnicas de produção. Nesse contexto foram realizados dois estudos relacionados à sanidade de peixes. O primeiro estudo foi realizado no intuito de quantificar a carga parasitaria de pacu, tambaqui e pirapitinga e seus híbridos, o paqui, o pirapicu e Pós F1. No segundo estudo, objetivou-se isolar e relatar a incidência da estreptococose e outros possíveis patógenos em pisciculturas de policultivo da região de Lavras – MG. Para as análises parasitológicas, foram feitas coletas brânquias de representantes de cada grupo genético, no qual foram encontrados dois gêneros de parasitas monogenéticos, Anacanthorus sp. e Mymarolhecium sp. Foram realizados cálculos dos parâmetros de prevalência, intensidade média, abundância e fator de condição. Para a identificação bacteriológica, foram coletadas amostras aleatórias de peixes em sete criatórios de policultivo de peixes da microrregião de Lavras, que contemplam as seguintes cidades: Lavras, Itutinga, Itumirim, Nepomuceno, Carrancas, São Sebastião da Vitória e Ingaí. Exemplares de tilápia, dourado, cará, curimba, surubim e piracanjuba foram analisados. Amostras de órgãos dos peixes coletadas e semeadas em meio de cultura. Após o período de incubação, a identificação dos microrganismos foi efetuada, segundo as características de cultura da bactéria, morfológicas, tintoriais e bioquímicas. Foram identificadas colônias de Estreptococos, Aeromonas e Edwardsiella. As doenças bacterianas foram encontradas apenas em tilápia, cará e curimba. Palavras-chave: Sanidade em animais aquáticos. Ectoparasitas. Bactérias. Peixes nativos. GENERAL ABSTRACT Increased susceptibility to parasitic, bacterial and infectious diseases has caused great losses in fish farming. The incidence of parasites and bacteria are a major cause of losses in industrial and sport fish farms. The aquatic environment facilitates the reproduction, dispersal and survival of pathogens. Research on the area of fish health are scarce, especially when regarding native species. The increase in continental aquaculture aroused greater interest of producers and researchers regarding the health aspects in order to improve production techniques. In this context, two studies regarding fish health were conducted. The first study was conducted in order to quantify the parasite load on pacu, tambaqui and pirapitinga, as well as on the hybrids, paqui, pirapicu and Post F1. In the second study, the objective was to isolate and report the incidence of streptococcus and other potential pathogens in polyculture fish farms in Lavras, Minas Gerais, Brazil. For parasitological analysis, we collected gills from representatives of each genetic group, in which we verified two kinds of monogeneans parasites, Anacanthorus sp. and Mymarolhecium sp. We calculated the parametersof prevalence, average intensity, abundance and condition factor. For bacterial identification, random fish samples were collected from seven polyculture fish farms of the micro-region of Lavras, which include the following municipalities: Lavras, Itutinga, Itumirim, Nepomuceno, Carrancas, Sao Sebastiao da Vitoria and Ingai. Specimens of tilapia, dourado, cara, curimba, catfish and piracanjuba were analyzed. Samples of fish organs were collected and seeded in culture medium. After the incubation period, the identification of the microorganisms was conducted according to the traits of the bacterium culture, morphological, and biochemical dyeing. Streptococcus, Aeromonas and Edwardsiella colonies were identified. Bacterial diseases were found only in tilapia, cara and curimba. Keywords: Sanity in aquatic animals. Ectoparasites. Bacteria. Native fish. SUMÁRIO PRIMEIRA PARTE .................................................................................. 13 1 INTRODUÇÃO.......................................................................................... 13 2 REFERENCIAL TEÓRICO ................................................................... 15 2.1 Espécies de interesses zootécnicos para aquicultura Brasileira ......... 15 2.2 Pacu Piaractus mesopotamicus ................................................................. 16 2.3 Tambaqui Colossoma macropomum ....................................................... 17 2.4 Pirapitinga Piaractus brachyopomus....................................................... 18 2.5 Híbridos ....................................................................................................... 20 2.6 Aspectos Sanitários .................................................................................... 23 2.7 Parasitologia em peixes ............................................................................. 29 2.7.1 Monogenéticos ............................................................................................ 32 2.7.2 Gênero Anacanthorus Mizelle e Price (1965) ........................................ 36 2.7.3 Gênero Mymarothecium Kritsky, Boeger e Jégu (1996) ...................... 39 2.8 Bactérias ...................................................................................................... 42 2.9 Efeitos dos patógenos sobre o desempenho ........................................... 43 3 CONSIDERAÇÕES GERAIS ................................................................. 47 REFERÊNCIAS ......................................................................................... 48 SEGUNDA PARTE - ARTIGOS ............................................................ 56 ARTIGO 1 Susceptibilidade a parasitas monogenéticos em Serrasalminídeos ......................................................................................... 56 1 INTRODUÇÃO.......................................................................................... 58 2 MATERIAL E MÉTODOS ..................................................................... 61 2.1 Local............................................................................................................. 61 2.2 Obtenção dos grupos genéticos................................................................... 62 2.3 Identificação dos parasitas ....................................................................... 62 2.4 Cálculo dos parâmetros parasitológicos ................................................ 63 2.5 Análises estatísticas ................................................................................... 64 3 RESULTADOS .......................................................................................... 65 3.1 Parâmetros de qualidade de água ........................................................... 65 3.2 Identificação dos grupos genéticos .......................................................... 65 3.3 Avaliação parasitológica ........................................................................... 66 4 DISCUSSÃO ............................................................................................... 69 5 CONCLUSÃO ............................................................................................ 72 REFERÊNCIAS ......................................................................................... 75 Artigo 2 Estudo epidemiológico e identificação de bactérias em pisciculturas de policultivo ....................................................................... 80 1 INTRODUÇÃO.......................................................................................... 82 2 MATERIAIS E MÉTODOS .................................................................... 85 3 RESULTADOS .......................................................................................... 87 4 DISCUSSÃO ............................................................................................... 90 5 CONCLUSÃO ............................................................................................ 93 REFERÊNCIAS ......................................................................................... 96 13 PRIMEIRA PARTE 1 INTRODUÇÃO A aquicultura mundial cresce mais do que qualquer outro setor de atividade primária, entre outros fatores, tem sido estimulada pelo aumento crescente da população e a demanda por alimentos saudáveis e ricos em nutrientes (BORGHETTI; OSTRENSKY; BORGHETTI, 2003; OLIVEIRA FILHO et al., 2010). O Brasil segue uma tendência mundial em consumir alimentos que tragam benefícios à saúde. O consumo de carne de peixe vai ao encontro dessa nova realidade, pois é rica em proteínas, vitaminas hidrossolúveis do complexo B e lipídeos, além de ser fonte de minerais fisiologicamente importantes (ORGANIZAÇÃO DAS NAÇÕES UNIDAS PARA A AGRICULTURA E ALIMENTAÇÃO - FAO, 2014). O aproveitamento dos recursos hídricos existentes tem proporcionado o desenvolvimento da piscicultura, com a criação de peixes em tanques-rede, tanque escavado ou açudes. É uma alternativa de investimento de menor custo e maior rapidez de implantação, apontada como um agronegócio capaz de melhorar as condições sociais, ambientais e econômicas de uma região (BRASIL, 2012). A rápida expansão da piscicultura no Brasil está diretamente ligada a sua rentabilidade, a qual é aprimorada ao adotar sistemas que utilizam rações balanceadas e de boa qualidade, por permitirem o aumento da produtividade com menor impacto ambiental. Entre os peixes nativos brasileiros de maior interesse na piscicultura se encontram: o pacu Piaractus mesopotamicus o tambaqui Colossoma macropomum e seus híbridos (BORGES et al., 2012). 14 Há uma forte concorrência entre produtos oriundos da pesca e da aquicultura, pois muitas espécies exploradas pelo extrativismo ainda não possuem pacote tecnológico disponível para criação (BOSCOLO et al., 2011). Dados referentes à estatística pesqueira do país mostram que o pacu, o tambaqui, a pirapitinga e os diversos híbridos, resultantes do cruzamento entre espécies nativas, até o momento, são os únicos peixes com expressiva importância econômica na piscicultura brasileira (KUBITZA; ONO; CAMPOS, 2007). A produção de pacu e seus híbridos tem apresentado uma tendência crescente nas pisciculturas brasileiras, como resultado do desenvolvimento de pesquisas que visam ao aprimoramento das técnicas de produção de peixes em geral, sobretudo de espécies nativas (KUBITZA; ONO; CAMPOS, 2007). Nas últimas décadas, os parasitos e bactérias de espécies de peixes introduzidas em sistemas de criação têm recebido atenção em virtude das implicações econômicas, sobretudo no caso das pisciculturas intensivas. Um grande número de parasitas pode causar grande mortalidade nas pisciculturas, sendo o tratamento um processo difícil e caro ao produtor (MARTINS et al., 2010). 15 2 REFERENCIAL TEÓRICO 2.1 Espécies de interesses zootécnicos para aquicultura Brasileira Os peixes pertencem à classe de vertebrados que possuem o maior número de representantes, com mais de 22.000 espécies catalogadas, entre peixes de água doce e salgada. Isto confere à piscicultura uma imensa gama de espécies com potencial zootécnico (SOARES et al., 2006). A produção aquícola nacional de origem continental aumentou de forma significativa no triênio 2008-2010, resultado de um incremento de, aproximadamente, 40% durante este período. Na transição de 2009 para 2010, a produção passou de 337.353 t em 2009 para 394.340 t. No Brasil, dentre espécies nativas e exóticas, são cultivadas mais de 40 espécies de peixes e 6 híbridos interespecíficos (GODINHO, 2007; HASHIMOTO et al., 2012). A tilápia e a carpa foram as espécies mais cultivadas, as quais somadas representaram 63,4% da produção nacional de pescado em 2010. Contudo, também merece destaque a produção de tambaqui, pacu e híbridos, que, juntos, representaram 24,6% da produção (BRASIL, 2013). Além da demanda por peixes de produção, a expansão do turismo ligado à pesca esportiva promove crescimento de sistemas de policultivo, sendo algumas espécies cultivadas para este fim, como as tilápias, surubim, curimba, piracanjuba, cará, dourado, além dos peixes redondos. Neste intuito, a criação em cativeiro destas espécies pode se tornar uma alternativa viável, através do subsídio de informações sobre o seu manejo em cativeiro, e melhora na sua conversão alimentar, para então obter sucesso em empreendimentos ligados à aquicultura (CYRINO, 2000). Os maiores problemas econômicos e ecológicos estão associados aos parasitos e bactérias que fazem parte da microbiota dos peixes ou microflora da 16 água, os quais atuam como limitadores da produtividade, pois provocam atraso no crescimento dos peixes e altas taxas de mortalidade (SANTANA; SOARES; VAZ-PIRES, 2011). 2.2 Pacu Piaractus mesopotamicus O pacu (Figura 1) é uma espécie da família Characidae, originária da Bacia do Prata, podendo ser encontrado nas Bacias do Paraná, Paraguai e Uruguai. É uma das espécies mais estudadas no Sul, Sudeste e Centro-Oeste do Brasil e recebe os nomes de caranha, pacu caranha ou pacu-guaçu (FROESE; PAULY, 2011; URBINATI; GONÇALVES; TAKAHASHI, 2010). O pacu é dos peixes mais estudados no Sul, Sudeste e Centro-Oeste do Brasil. É um peixe onívoro, que se alimenta de folhas, caule, frutos e sementes e, oportunamente, alimenta-se de insetos, aracnídeos, moluscos e outros peixes. Conforme a região, pode receber outros nomes como caranha, pacu-guaçu e pacu-caranha, possui o corpo discoide e estreito, podendo atingir até 20 kg no ambiente natural (URBINATI; GONÇALVES; TAKAHASHI, 2010). Dentre os peixes de cultivo no Brasil, o pacu é a espécie mais acometida com infestações parasitárias. Neste cenário, estudos que maximizem o crescimento e as respostas imunológicas dos peixes, reduzindo a utilização de quimioterápicos, são de extrema importância para garantir ao consumidor um produto final de qualidade (MARTINS et al., 2002; URBINATI; GONÇALVES; TAKAHASHI, 2010). 17 Figura 1 Pacu Piaractus Mesopotamicus 2.3 Tambaqui Colossoma macropomum O tambaqui (Figura 2) é uma espécie pertencente à família Serrasalmidae e à subfamília Serrasalminae. Peixe de piracema nativo das bacias dos rios Solimões, Amazonas e Orinoco é amplamente distribuído na parte tropical da América do Sul e na Amazônia Central e muito apreciado por seu sabor; sendo importante fonte de proteína animal, o tambaqui é onívoro com tendência a herbívoro, filtrador e frugívoro. Tem grande capacidade de digerir proteína animal e vegetal e de fácil adaptação à alimentação fornecida (SONG et al., 2011). O tambaqui é a principal espécie amazônica cultivada no Brasil e considerada o segundo maior peixe de escamas da bacia amazônica, perdendo em porte somente para o pirarucu Arapaima gigas. A facilidade de produção de alevinos e o rápido crescimento fizeram do tambaqui um dos peixes mais populares da piscicultura brasileira. Contudo, o risco de alta mortalidade, durante os meses de inverno, tem desencorajado o cultivo do tambaqui nos estados das regiões Sul e Sudeste, particularmente, em locais onde a água pode atingir temperaturas abaixo dos 17◦C (LOPERA-BARRERO et al., 2011). É 18 uma espécie relativamente bem adaptada às condições de cativeiro, aceitando rações artificiais e completas com índices desejáveis de crescimento e conversão alimentar. Ainda alcança preços atrativos nos exigentes mercados das grandes cidades amazônicas como Manaus, principal polo consumidor dessa espécie (ARAÚJO-LIMA; GOMES, 2005). O cultivo de tambaqui em tanques- rede, aproveitando recursos hídricos disponíveis, tem alcançado boa produtividade, indicando que essa modalidade de piscicultura intensiva é promissora para a criação do tambaqui em todo território nacional (LOPERA- BARRERO et al., 2011). Figura 2 Tambaqui Colossoma Macropomum 2.4 Pirapitinga Piaractus brachyopomus A pirapitinga (Figura 3) pertence à ordem Characiformes, família Characidae e são originárias das bacias dos rios Amazonas, Solimões e Orinoco e seus afluentes, pode atingir 80 cm de comprimento e 20 kg de peso. Possui um rápido crescimento, carne de grande aceitação no mercado e excelentes condições para a piscicultura. De hábito alimentar onívoro, a pirapitinga se alimenta de frutas, folhas, sementes e microcrustáceos. A pirapitinga é a única 19 espécie do gênero Piaractus encontrada na Bacia Amazônica, na América do Sul (FROESE; PAULY, 2011). É uma espécie rústica de rápido crescimento, carne de grande aceitação no mercado, excelentes condições para a piscicultura e de grande importância econômica para cultivo em escala comercial na Colômbia, Brasil, Peru, Venezuela e América Central (ALCÂNTARA; OLIVEIRA; NOBRE, 1990; VÁSQUEZ-TORRES; PEREIRA; ARIAS-CASTELLANOS, 2002). No Brasil os primeiros trabalhos, visando à produção de alevinos em larga escala e a avaliação do desempenho da pirapitinga em cultivo, foram realizados pelo DNOCS na década de 70. Em virtude de apresentar um crescimento mais lento do que o tambaqui, o cultivo comercial da pirapitinga não se tornou tão popular no Brasil, no entanto, esse peixe tem sido utilizado em cruzamentos para obtenção de híbridos com o pacu (patinga) e com o tambaqui (tambatinga) (ZORRO et al., 2012). Figura 3 Pirapitinga Piaractus brachypomum 20 2.5 Híbridos Segundo Chevassus (1983), os estudos de hibridação em peixes iniciaram-se ao final do século dezenove e tiveram impulso a partir de 1919, na América do Norte, com Carl Leavitt Hubbs e seus colaboradores, ao estudarem hibridização de peixes de água doce na natureza. Em estudos realizados com híbridos de espécies do gênero Epomis, Hubbs (1955) começou a compreender melhores fatores básicos do processo de hibridação interespecífica e as vantagens apresentadas por este processo. Os exemplares híbridos das espécies estudadas geralmente apresentavam características taxonômicas intermediárias entre as espécies parentais, podendo até mesmo superá-las em certos aspectos, tais como crescimento rápido, maior brilho e intensidade de coloração, domínio no ambiente e até maior capacidade de capturar o alimento. Em resumo, tais híbridos apresentaram “vigor híbrido” ou “heterose” (CHEVASSUS, 1983). Os híbridos se originam a partir de acasalamentos entre grupos populacionais de base genética distinta em uma ou mais características hereditárias. A hibridização pode envolver tanto cruzamentos entre linhagens diferentes dentro de uma mesma espécie, quanto entre indivíduos de espécies diferentes (BARTLEY; RANA; IMMINK, 2001). A aplicação da técnica de hibridação nas grandes pisciculturas visa produzir animais que possam obter melhor desempenho que as espécies parentais (FRANCIS; MAKKAR; BECKER, 2001). Em peixes, a hibridação é um fenômeno bastante comum, se comparado aos diversos grupos de vertebrados (ALLENDORF; WAPLES, 1996). Isto ocorre pelas características peculiares do grupo, entre elas a fertilização externa, mecanismos de isolamento, competição por territórios de desova, abundância de espécies e sobrevivência em ambientes limitados. Além do mais, metade dos eventos de hibridação em peixes tem sido atribuída à intervenção humana, com 21 as atividades de aquicultura sendo o principal fator, seguidas de introduções de espécies fora do seu local de origem e alterações de hábitat, como observado por Scribner, Page e Bartron (2001). A maioria das linhagens de peixes geneticamente melhoradas que alcançam a indústria da aquicultura foi desenvolvida através de métodos tradicionais de manipulação genética, que incluem seleção, hibridação e endogamia (HULATA, 2001). Muitas vezes, as características climáticas regionais levam o produtor a buscar espécies mais adaptadas ao local de cultivo, outras vezes a disponibilidade de alevinos e insumos tem provocado a escolha do peixe a ser trabalhado. A demanda do mercado, também, pode ter forte influência na escolha de uma determinada espécie, como se tem observado ultimamente com as tilápias. Entretanto muitas dessas espécies são frequentemente selecionadas de forma errônea, quando o piscicultor, motivado principalmente pela propaganda, deixa de considerar a adequação de uma espécie às características ambientais de sua região ou à forma de comercialização de que ele dispõe (PAVANELLI; EIRA; TAKEMOTO, 2008). Atualmente, a produção de híbridos de peixes envolve várias espécies Neotropicais, com produtos viáveis e de grande interesse para os produtores (PORTO-FORESTI; FORESTI, 2010). A subfamília Serrasalminae inclui 15 gêneros e 80 espécies, com uma distribuição estritamente na região Neotropical, atualmente, este grupo é classificado em nível de família, denominado Serrasalmidae (MIRANDA; RIBEIRO, 2010) e engloba os peixes conhecidos popularmente como Pacus e Tambaquis. Com base em dados moleculares, os serrasalmídeos são compreendidos por três grupos principais: “Piranha”, “Myleus” e “Pacu” (CRUZ; VENCOVSKY, 2010). 22 Atualmente, é por meio da técnica de hibridação interespecífica que o cultivo deste grupo de peixes tem merecido grande destaque na piscicultura brasileira. Para a obtenção de híbridos, os principais cruzamentos interespecíficos envolvem as espécies Colossoma macropomum, Piaractus mesopotamicus e P. brachypomus, que podem gerar uma grande heterogeneidade de produtos. Estes são produzidos discriminadamente e comercializados em larga escala pelas pisciculturas brasileiras (HASHIMOTO et al., 2012). A produção de híbridos interespecíficos tornou-se uma prática comum nas pisciculturas brasileiras e já foi demonstrado que a hibridização entre pacu e tambaqui é viável, as alterações no crescimento ponderal, morfométrico e alométrico; no desenvolvimento das gônadas sexuais; nas características de qualidade da carcaça e da carne e reprodutivas advindas da produção de híbridos envolvendo cruzamento entre as espécies pacu, tambaqui e pirapitinga, ainda não foram devidamente estudadas (Pavanelli; EIRAS; TAKEMOTO, 2008). Para a identificação dos híbridos, existem diversas metodologias propostas na literatura, que podem ser aplicadas na busca de informações diagnósticas. Algumas dessas técnicas, muitas vezes de difícil execução e custo elevado, podem envolver análises morfogenéticas; análises de marcadores citogenéticos, realizadas através de estudos de cariótipos e da aplicação de vários tipos de bandamentos cromossômicos; uso de marcadores genético- bioquímicos, obtidos pela eletroforese de alozimas e isozimas; métodos genético-moleculares, com a análise de regiões específicas do DNA nuclear e mitocondrial (DAL PAI-SILVA, 2003). 23 Tabela 1 Relação de cruzamentos entre pacu, pirapitinga e tambaqui Genitora Genitor Híbrido Pacu P. mesopotamicus Pirapitinga P. brachypomus Patinga Pacu P. mesopotamicus Tambaqui C. macropomum Paqui Pirapitinga P. brachypomus Pacu P. mesopotamicus Piracu Pirapitinga P. brachypomus Tambaqui C. macropomum Pirapiqui Tambaqui C. macropomum Pacu P. mesopotamicus Tambacu Tambaqui C. macropomum Pirapitinga P. brachypomus Tambatinga Fonte: (PORTO-FORESTI et al., 2008) 2.6 Aspectos Sanitários Com a expansão da piscicultura no Brasil, a partir da década de 80, observou-se um crescente interesse por parte dos criadores no que diz respeito aos prejuízos econômicos causados pela mortalidade de peixes (THATCHER, 2006). Devido às implicações econômicas, sobretudo no caso das pisciculturas intensivas, o interesse em pesquisas com parasitas e bactérias de peixes tem sido renovado, nas últimas décadas. As altas taxas de infestações ou infecções parasitárias podem causar mortalidade apreciável nas diversas espécies de peixes cultivadas. Em alguns casos, o tratamento é muito difícil ou não existem atualmente processos terapêuticos eficazes (SCHALCH; MORAES; MORAES, 2006). Os prejuízos causados pelos parasitas podem ser verificados de um modo indireto, seja através da redução das taxas de assimilação e desempenho, reduzindo o valor do produto final (EIRAS; TAKEMOTO; PAVANELLI, 2006). Inúmeros organismos têm sido relacionados com parasitoses em peixes; estes organismos, embora ocorram em ambientes naturais, tornam-se mais abundantes em condições de cultivo intensivo. Dependendo das condições da criação pode ter efeito deletério dos animais. Dentre esses organismos, podemos citar os trematódeos monogenéticos, como o Anacanthorus sp. e o 24 Mymarothecium sp. Estes parasitas se fixam principalmente nas brânquias dos peixes. Além disso, alguns crustáceos, como Argulus, Lernaea e Ergasilus, microcrustáceos da família Copepodidae, são parasitas e vetores de bactérias e vírus e podem facilitar a ocorrência de infecções secundárias (SCHALCH; MORAES; MORAES, 2006). O cultivo intensivo de peixes pode ser afetado por quatro grandes grupos de patógenos, parasitas (ecto e endo), fungos, bactérias e organismos produtores de toxinas (cianobactérias). A alta densidade de peixes na piscicultura pode propiciar a proliferação desses agentes patogênicos, pois em ambientes em equilíbrio essas doenças são controladas naturalmente. Porém, más condições de manejo zootécnico, com cultivo de espécies exóticas, podem ser responsáveis por doenças tanto nos animais em criação como nas espécies de fluxos autóctones. Em ambientes eutrofizados, esta situação pode vir a se agravar devido à presença de muitas espécies de hospedeiros intermediários, facilitando o ciclo de vida de muitos parasitas (ZANOLO, 2004). As condições sanitárias são fatores importantes, na criação de peixes em cultivo, visto que vários fatores como altas densidades de estocagem, a má qualidade da água, uma alimentação que não atenda às exigências nutricionais da espécie, o estresse ocasionado pela despesca e o transporte, podem facilitar o acesso e a invasão de agentes patogênicos, acarretando prejuízos econômicos incalculáveis. Em geral os danos causados ao hospedeiro estão relacionados à espécie de parasito, bem como à sua forma de alimentação, ao órgão ou tecido do hospedeiro afetado, à intensidade parasitária e ao estado geral do hospedeiro e aos fatores ambientais (EIRAS; TAKAMOTO; PAVANELLI, 2010). No tanque de piscicultura deve haver equilíbrio entre a saúde do hospedeiro, a proliferação de agentes patógenos e as condições do ambiente aquático. Desse modo, a má qualidade de água, a redução de oxigênio dissolvido, alterações bruscas de temperatura, alta densidade de peixes, manejo 25 inadequado ou nutrição desequilibrada são fatores capazes de produzir estresse aos animais, predispondo-os a diferentes infecções bacterianas, fúngicas e parasitárias. Considera-se a água um ambiente extremamente favorável para a proliferação destes agentes sendo as parasitoses responsáveis por grandes perdas nas pisciculturas em nível mundial, sendo de maior relevância no neotrópico, devido às características climáticas destas regiões (THATCHER, 1994). A disseminação de doenças parasitas e bacterianas para os cursos d’água é um fenômeno recorrente no Brasil. Quarentenas e controle sanitário rigoroso das fontes produtoras de alevinos, bem como monitoramentos periódicos da qualidade sanitária dos efluentes e de tanques de cultivo são necessários e devem estar explicitados no projeto de piscicultura (PÁDUA et al., 2012b). O manejo inadequado pode causar graves problemas de doenças nos peixes cultivados nos diversos sistemas de criação (TAVARES-DIAS, 2011). Parasitos, baterias, fungos e vírus são os principais patógenos diagnosticados em estudos realizados a campo em diferentes unidades produtoras de peixes (PÁDUA et al., 2012a, 2012b). A sanidade é um ponto crítico na criação e, também, limita a qualidade do pescado produzido. Grande parte dos problemas sanitários na piscicultura é decorrente de erros de manejo. Além disso, casos humanos de parasitoses transmitidas pelo consumo de peixes têm sido descritos em vários países, principalmente, onde há o hábito de consumo de pescado cru (BARROS; CASTRO; PATRÍCIO, 2006). A resistência individual do peixe é importante e está relacionada com o estado nutricional do animal. Além disso, problemas com excesso de densidade e qualidade de água contribuem para o aparecimento de doenças. O estresse resultante das falhas de manejo ocasiona redução na resistência do organismo, fazendo com que em pouco tempo o peixe doente ou parasitado possa morrer (TAVARES-DIAS, 2011). 26 Quando as situações estressantes são inevitáveis e previsíveis, tais como a chegada do inverno nas regiões sudeste e sul do país ou a limitada disponibilidade de água de boa qualidade e quantidade, o piscicultor pode promover o aumento na capacidade de resistência dos animais cultivados através da continuação das práticas usuais de manejo. Uma dieta com maior qualidade é uma das melhores formas de melhorar o estado de saúde dos peixes (MARTINS et al., 2002). No Brasil são poucos os estudos realizados para testar a eficácia e os efeitos secundários de drogas utilizadas para combater parasitoses e bactérias em peixes, principalmente, nas criações intensivas (MARTINS et al., 2002). Sem a comprovação científica de sua eficácia, não é possível prever a extensão do prejuízo e, em muitos casos, parece ser melhor sacrificar o plantel, drenar e desinfetar o tanque e, a seguir, recomeçar a criação (PAVANELLI; EIRAS; TAKEMOTO, 2008). Assim, o manejo adequado da piscicultura é, sem dúvida, a medida mais importante a ser tomada para evitar que os peixes sejam acometidos pelos mais variados parasitos. Todos os peixes no ambiente natural apresentam uma fauna parasitária e bacteriana característica, muitas vezes, sem manifestação patogênica que, entretanto, pode aparecer em condição de piscicultura devido ao aumento da densidade populacional. É de fundamental importância o controle rígido da qualidade da água, do nível do oxigênio, da temperatura, do pH, do fluxo de água nos tanques e da densidade populacional. O transporte adequado dos peixes também é um fator significativo, pois o estresse e as lesões podem facilitar diversas infecções (MARTINS et al., 2002). Quando os organismos aquáticos se encontram intensamente parasitados ou com lesões profundas, dificilmente recuperam sua normalidade com tratamentos. Portanto, é fundamental o uso de diversas medidas profiláticas. (PÁDUA et al., 20012a) 27 Os peixes nem sempre adoecem e morrem quando são desafiados por agentes estressores. Normalmente, adaptam-se ao estresse por um período de tempo finito. Durante este período, os peixes podem parecer normais, embora estejam utilizando reservas energéticas e redirecionando o uso da energia em função das exigências extras impostas. Nesta condição, deixam de crescer e de se reproduzir, priorizando o retorno à condição de homeostase. Se há necessidade de redistribuição de energia, os peixes devem estar preparados, principalmente, para prover energia, além de outros compostos como vitaminas e minerais que agirão como substrato para o funcionamento adequado do sistema imunológico (BARTON; IWAMA, 1991). De acordo com Pavanelli, Eiras e Takemoto (2008), uma forma de minimizar, ou até de evitar todos esses problemas de transmissão de doenças parasitárias e bacteriológicas, pode ser a adoção por parte dos órgãos públicos, de medidas preventivas com o objetivo de disciplinar o transporte de peixes de um local para outro. Seria a exigência do chamado “Certificado Ictiossanitário”. Este documento comprovaria, através de exames efetuados pelos especialistas, que os peixes de determinadas pisciculturas se apresentam negativos para doenças e, portanto, podem ser transportados sem perigo para outras pisciculturas. Este procedimento, sem dúvida, diminuiria drásticamente as possibilidades de disseminação das doenças parasitárias em peixes no Brasil como já foi feito na América do Norte e em vários países da Europa. A identificação e quantificação de parasitos e bactérias podem fornecer subsídios para um melhor procedimento no controle de enfermidades em ambientes controlados e, ainda, como indicadores de qualidade ambiental, para que se possam sugerir práticas de manejo profiláticas adequadas e, quando possível, realizar intervenções terapêuticas (SCHALCH; MORAES; MORAES, 2006). 28 Estudos comprovam que o pacu é hospedeiro natural de monogenoides da espécie Anacanthorus penilabiatus (PAVANELLI; EIRAS; TAKEMOTO, 2008), e Mymarothecium viatorum (COHEN; KHON, 2005). Em pacus cultivados, tem sido relatada a ocorrência de A. penilabiatus, A. spathulatus, Urocleidoides sp. e M. viatorum (URBINATI; GONÇALVES; TAKAHASHI, 2010). Em pirapitingas, também, já foi registrada a ocorrência de A. penilabiatus e M. viatorum (COHEN; KHON, 2005). Parasitas e bactérias, de uma forma geral, podem ser encontradas tanto em peixes de populações naturais como em animais criados em cativeiro. Na literatura, há vários relatos sobre a ocorrência de parasitas em pacus e pirapitingas, no entanto, não há dados sobre o parasitismo no híbrido patinga, provavelmente, por ser uma linhagem relativamente recente. Entre as classes de helmintos parasitas de pacu e pirapitinga procedentes de populações naturais ou criadas em sistemas intensivos, já foram relatados monogenoides, nematoides, trematódeos, cestoides e acantocéfalos, além de infestações por protozoários, mixosporídeos e crustáceos (EIRAS; TAKEMOTO; PAVANELLI, 2010). Estudos comprovam que o pacu é hospedeiro natural de monogenoides da espécie Anacanthorus penilabiatus (PAVANELLI; EIRAS; TAKEMOTO, 2008), e Mymarothecium viatorum (COHEN; KHON, 2005). Em pacus cultivados, tem sido relatada a ocorrência de Anacanthorus penilabiatus, A. spathulatus, Urocleidoides sp. e M. viatorum (URBINATI; GONÇALVES; TAKAHASHI, 2010). Em pirapitingas, também já foi registrada a ocorrência de A. penilabiatus e M. viatorum (COHEN; KHON, 2005). Um cruzamento que vem sendo muito realizado em pisciculturas com objetivo de obter tais características desejáveis é entre as espécies pacu e tambaqui (PAMPLONA-BASILIO; KOHN; FEITOSA, 2001). Os híbridos provenientes desse cruzamento são conhecidos como Tambacu fêmea de tambaqui (Colossoma macropomum) e macho de pacu (Piaractus 29 mesopotamicus), Paqui (fêmea de pacu e macho de tambaqui) e Pirapicu femea de Pirapitinga (Piaractus brachypomus), e macho Pacu (Piaractus mesopotamicus). O cruzamento entre essas duas espécies é bem sucedido, por elas possuírem o mesmo número de cromossomos (2n =54), o que permite o pareamento e a formação de embriões (TAVARES-DIAS et al., 2001). 2.7 Parasitologia em peixes Um dos grandes desafios da piscicultura no Brasil é reduzir as perdas na produção relacionadas ao manejo inadequado no sistema de criação. Estes procedimentos acabam promovendo o desenvolvimento de doenças infecciosas e parasitárias (MARTINS et al., 2002). Na maioria dos casos, a seleção natural resulta em organismos que causam um mínimo de prejuízo ao hospedeiro. As epizootias são o resultado de uma ruptura no relacionamento equilibrado do hospedeiro com o parasita, criada por condições artificiais. O principal sinal clínico dessas doenças é a intensa produção de muco nas brânquias e superfície corporal do peixe (PAVANELLI; EIRAS; TAKAMOTO, 2008). A parasitologia é a que mais integra as escalas biológicas promovendo um forte paradigma que conecta a ecologia, sistemática, evolução, biogeografia, comportamento e uma coleção de fenômenos biológicos que vão do molecular ao nível de organismos através da sucessão de micro e macroparasitas e seus hospedeiros vertebrados e invertebrados. Parasitos podem ser importantes em avaliações de impactos antropogênicos e naturais de fauna e ecossistema. Em sistemas marinhos, por exemplo, fenômenos climatológicos, oscilações ou mudanças cíclicas de circulação atmosférica influenciam os padrões oceânicos e das massas de água, os quais refletem nas estruturas das teias alimentares e na fauna parasitária (JERÔNIMO et al., 2011; TAVARES-DIAS et al., 2001). 30 Em condições de piscicultura intensiva onde a proximidade entre hospedeiros é favorecida esses parasitos podem se tornar um problema. Os peixes acometidos podem apresentar asfixia o que pode significar um impacto negativo para os sistemas de piscicultura (PAVANELLI; EIRAS; TAKEMOTO, 2008). A intensificação dos cultivos culmina em problemas relacionados à qualidade de água, alimentação, doenças infecciosas e parasitárias com significativos prejuízos econômicos (JERÔNIMO et al., 2011; MARTINS et al., 2002). Os estudos com parasitas e outros patógenos de organismos aquáticos ganharam destaque, principalmente entre as espécies de peixes com potencial para a comercialização (MARTINS et al., 2010). Em um viveiro de piscicultura deve haver equilíbrio entre hospedeiro / parasito / ambiente, desse modo, o manejo inadequado, altas densidades de estocagem, alterações bruscas de temperatura, redução de oxigênio dissolvido, nutrição inadequada e a degradação da qualidade de água, são fatores que favorecem estresse dos animais, tornando-os assim susceptíveis a enfermidades (ZANOLO; YAMAMURA, 2006). Os sistemas de produção intensiva como, por exemplo, a criação de peixes em tanques-rede, utilizam altas densidades de estocagem, sendo comuns neste tipo de criação problemas de manejo, má qualidade da água, carências nutricionais e também doenças e surtos de parasitos. Estes problemas podem causar estresse nos peixes, predispondo-os ao ataque de vários organismos patogênicos, principalmente protozoários e monogenoides (CARVALHO et al., 2012; KUBTIZA; KUBTIZA, 2004). Existem registros de ocorrência de vários parasitas com potencial patogênico em criações intensivo de peixes nativos entre eles encontram-se os mixosporídeos, os crustáceos, os acantocéfalos e, ainda, os helmintos 31 monogenoides e este último grupo é o que apresenta altos valores de intensidade parasitária registrados em peixes cultivados. Com relação aos monogenoides, as espécies de maior ocorrência são anacanthorus spathulatus, linguadactyloides brinkmanni e notozothecium sp. Altas taxas de infestações parasitárias podem afetar o desempenho dos peixes sob cultivo e aumentar a taxa de mortalidade (MACIEL et al., 2011). Tendo os parasitos como indicadores da biologia do hospedeiro, de contaminantes ambientais e estrutura de cadeia alimentar, a comunidade parasitária de peixes pode ser um bom demonstrativo de estresse ambiental e biodiversidade (LIZAMA et al., 2007). Bons indicadores podem ser excepcionalmente sensíveis às modificações ambientais, e as alterações significativas no número de indivíduos nas populações podem ser utilizadas como um alerta das condições deteriorantes, antes da maioria dos organismos menos sensíveis serem seriamente afetados (MACKENZIE et al., 1995). O ciclo de alguns parasitos depende de organismos pequenos e delicados e a mínima variação ambiental atinge esses organismos, refletindo sobre o parasitismo dos peixes. A escolha de qual parasito apresenta condições de ser utilizado como ferramenta de análise ambiental é complexa (MACIEL; TASCA; DE CARLI, 2011). A utilização de monogenéticos como indicadores de alterações ambientais foi citada por Mackenzie et al. (1995), ao afirmarem que o baixo nível de poluição pode produzir um efeito hormético em alguns ectoparasitas, aumentando a reprodução e causando um aumento marcante nas populações parasitas. A identificação das espécies de monogenoides parasitas de peixes está baseada principalmente em aspectos morfológicos, sendo as estruturas esclerotizadas do háptor importantes para a taxonomia. Recentemente, tem sido 32 sugerido o uso de técnicas moleculares, em especial o RAPD (Randon Amplified Polymorphic DNA), para auxiliar na identificação específica destes helmintos. Os monogenoides parasitas de peixes de água doce são predominantemente representados por espécies das famílias Gyrodactylidae e Dactylogyridae (EIRAS; TAKEMOTO, PAVANELLI, 2006). Com o desequilíbrio na integridade biótica do ecossistema aquático, variações nas comunidades de peixes e seus parasitos refletem a perda da qualidade ambiental. Ectoparasitos de peixes cultivados, por sua vez, mostram variações na sua composição diante de inadequado manejo alimentar e aquático (CHAGAS et al., 2007). 2.7.1 Monogenéticos Por muito tempo os monogenéticos foram considerados uma ordem da classe Trematoda e o nome Monogenêa foi amplamente aceito. Com a elevação do grupo ao nível de classe e a proposta de uma emenda que sugeriu a mudança do nome do grupo para Monogenoidea, ocorreu uma aparente confusão na nomenclatura. Alguns autores aceitaram essa classificação e outros rejeitaram a divisão e continuaram a tratar os monogenéticos como uma ordem, outros aceitaram a elevação do grupo ao nível de classe e continuaram a usar o nome Monogenêa, que é uma adaptação do nome original em Francês, “monogénèses” a um sufixo latinizado. Uma resolução adotada no 4º congresso internacional de parasitologia em 1978 chegou ao consenso de adotar Monogenea como nome da classe. Apesar da rejeição por parte de alguns pesquisadores, que argumentavam a inaplicabilidade do código de nomenclaturas às altas categorias taxonômicas, abrindo precedente para o uso do nome Monogenoidea, o nome Monogenea permaneceu com a justificativa de que Monogênea e Monogenoidea referem-se ao mesmo grupo de organismos. Na ausência de regras, o nome a ser aplicado 33 em um táxon superior pode ser determinado por consenso entre especialistas, sendo o nome Monogenea mais amplamente usado por estes (ABDALLAH; AZEVEDO; LUKE, 2006). Os Monogenoideas são helmintos pertencentes ao Filo Platyhelminthes, que desempenham o papel de ectoparasitas na superfície do corpo, brânquias, cavidade nasal e sistema urinário de peixes são hermafroditas com ciclo de vida direto, em peixes habitam brânquias, pele, fossas nasais, ureter e intestino. Em anfíbios e répteis aquáticos podem ser encontrados na boca, cloaca ou bexiga urinária. O háptor é uma estrutura muito importante na identificação dos monogenéticos (EIRAS; TAKEMOTO; PAVANELLI, 2010; TAKEMOTO et al., 2004). Os girodactilídeos, em geral, são vivíparos e, na sua maioria, parasitam a superfície do corpo e brânquias dos peixes e podem apresentar um ou dois pares de manchas ocelares (olhos), facilmente identificadas por microscopia. Estes parasitas quase sempre são encontrados nas brânquias, podendo se alojar também nas cavidades nasais e superfície do corpo (PAVANELLI; EIRAS; TAKEMOTO, 2008). Os membros da classe monogenea são ectoparasitos de brânquias, pele e orifícios de peixes, anfíbios e répteis e, menos frequentemente, do trato esofagiano e vesícula (EIRAS; TAKEMOTO; PAVANELLI, 2010). Calcula-se que há mais de 3.000 espécies de monogenéticos parasitas de peixes, muitos dos quais específicos para determinada espécie hospedeira (CRUZ-LACIERDA et al., 2000). Os monogenéticos são ectoparasitos do grupo dos platelmintos (trematódeos), presentes na maioria dos ambientes aquáticos e relacionados a infecções em diversas espécies de peixes. Os monogenéticos possuem estruturas específicas, denominadas de haptor, que dispõem de ganchos para a fixação aos hospedeiros. Geralmente são encontrados no corpo e nas nadadeiras, embora possa, eventualmente, instalar-se nas brânquias. O parasito provoca aumento na 34 secreção de muco, prurido e irritação do epitélio. Nas brânquias infecções severas, resultam na inflamação e destruição do epitélio branquial, ruptura dos capilares sanguíneos, prejudicando a respiração e o equilíbrio osmorregulatório dos peixes. A intensificação dos sistemas de produção, com o aumento na densidade de estocagem e nos níveis de arraçoamento, favorece a infecção por provocarem aumento da carga orgânica e redução na qualidade da água. Os monogenéticos são capazes de se reproduzir eficientemente sob condições de baixa qualidade de água e se aproveitam da queda de resistência dos peixes para causar sérias infecções (KUBITZA; KUBITZA, 2004). De acordo com Cruz-Lacierda et al. (2000), os monogenéticos são um grupo bem diversificado e de alta especificidade em relação ao hospedeiro. O ciclo de vida dos monogenéticos é direto e todos os estágios se completam em um único hospedeiro, podem ser vivíparos ou ovovivíparos. A ocorrência de Monogenoideas nas brânquias dos peixes pode ocasionar hiperplasia celular, hipersecreção de muco e, em alguns casos, fusão de filamentos das lamelas das brânquias. Nos casos onde há produção excessiva de muco, pode ocorrer impermeabilização das brânquias, com isso dificultando a respiração e levando os indivíduos à morte por asfixia (EIRAS et al., 2012). O háptor localiza-se na extremidade posterior do parasito, podendo ser armado com estruturas esclerotizadas tais como âncoras, barras e ganchos; em alguns gêneros podem estar presentes grampos. O sistema reprodutor masculino inclui testículo, vesícula seminal, peça acessória e órgão copulátorio masculino. Já o sistema reprodutor feminino é formado por germário, oviduto, receptáculo seminal (podendo estar ausente) e vagina. O sistema digestório consiste em boca, faringe, esôfago e cecos intestinais. Os monogenéticos podem ser vivíparos (como alguns da família Gyrodactylidae) ou ovíparos (todas as outras famílias) e seu estágio larval chama-se oncomiracídium. São divididos geralmente em dois maiores grupos chamados Polyopisthocotylea e 35 Monopisthocotylea, diferenciados de acordo com a morfologia do órgão de fixação dos adultos (GUIDELLI et al., 2011). Quando esses ectoparasitas encontram-se aderidos ao tegumento, comumente causam lesões mais brandas, porém, podem abrir portas de entrada para eventuais infecções secundárias. As doenças causadas por Monogenoideas estão entre as mais importantes para a piscicultura, uma vez que provocam elevadas taxas de mortalidade nos peixes (PAVANELLI; EIRAS; TAKEMOTO, 2008). As lesões provocadas podem ser secundariamente invadidas por fungos e bactérias, podendo ocasionar, para os hospedeiros, consequências mais graves. Pode ocorrer patogenia ocular, podendo levar à opacidade e ulceração de córnea, ruptura do globo ocular e degeneração das estruturas internas do mesmo. Muitos estudos demonstram que a mortalidade pode ser elevada, em espécies cultivadas. Apesar de não constituírem geralmente uma preocupação para piscicultores, sob o ponto de vista parasitológico, os monogenéticos podem ser de importância econômica considerável (EIRAS et al., 2012). Apesar de esforços dos taxonomistas, a diversidade de monogenéticos neotropicais ainda é largamente desconhecida. A estimativa é de que menos que 3% de monogenéticos de água doce sejam conhecidos (GUIDELLI et al., 2011). A biodiversidade representa uma sucessão através de uma variedade de escalas, componentes numéricos, ecológicos e filogenéticos numa estrutura temporal e espacial. Esses componentes envolvem habitats, ecossistemas e comunidades, diversidades genéticas nas populações de espécies, genealogia e taxonomia, história e geografia (GUIDELLI et al., 2011). Considerando-se a gravidade desta parasitose e também a dificuldade de se erradicar essa enfermidade, depois de instalada na piscicultura, sugere-se que todos os novos peixes adquiridos sejam submetidos a banhos profiláticos e à quarentena, pois são de ciclo evolutivo direto, o que facilita sua propagação. O 36 tratamento pode ser feito por imersão em formalina comercial, diluída em 1:4.000, durante uma hora ou em cloreto de sódio de 1 a 3% de 30 minutos a 3 horas (EIRAS et al., 2012). 2.7.2 Gênero Anacanthorus Mizelle e Price (1965) MONOGENEA Bychowsky (1937) DACTYLOGYRINEA Bychowsky (1937) DACTYLOGYRIDEA Bychowsky (1937) DACTYLOGYRIDAE Bychowsky (1933) ANACANTHORINAE Price (1967) Anacanthorus Mizelle e Price (1965) Descrição do gênero Anacanthorus (Figura 4), Mizelle e Price (1965), parasito de brânquias de espécies de peixes Characiformes, conforme Kritsky, Boeger e Van Every (1992); Thatcher (2006). Corpo fusiforme dividido em região cefálica, tronco, pedúnculo e haptor. A região peduncular pode ser ondulada. Tegumento fino e liso. Lobos cefálicos, órgãos da cabeça e glândulas cefálicas presentes. Quatro lobos cefálicos, dois terminais e dois laterais. Glândulas cefálicas compreendendo dois grupos bilaterais de células que se encontram posterior e dorsal à faringe. Quatro ou dois ocelos, com o par de ocelos posterior maior; grânulos dos ocelos presentes ou ausentes. Faringe bulbosa, muscular e glandular, uma subunidade. Esôfago presente. Dois cecos intestinais confluentes e posteriores ao testículo, sem divertículo lateral. Ganchos dactilogirídeos com a porção proximal do pedúnculo inflada, dividida em duas porções evidentemente definidas, ou simples. 14 ganchos com distribuição anacantorine (6 dorsais e 8 ventrais). Gênero reconhecido principalmente pela ausência de âncoras e barras. Gônadas sobrepostas, entre os 37 cecos intestinais; testículo posterior ao ovário, sendo esse localizado próximo à região média do tronco. Canal deferente estende-se até a vesícula seminal fusiforme, com uma alça antes de sua entrada na base do órgão copulatório masculino (OCM), pode enlaçar-se no ceco intestinal esquerdo. Vesícula seminal fusiforme. Reservatório prostático arredondado a oval. Complexo copulatório constituído pelo OCM esclerotizado e peça acessória, presente ou ausente; peça acessória em formato de J, sinuosa, um pouco reta ligeiramente encurvada ou enrolada. Uma peça acessória, não articulada ou articulada diretamente ao OCM. Ovário oval a alongado; sólido. Oviduto curto. Vagina ausente. Receptáculo seminal geralmente ausente. Útero bem desenvolvido com a porção terminal constituída por uma parede interna levemente esclerotizada. Poro genital comum medioventral. Vitelinos distribuídos por todo o parênquima desde a faringe até o pedúnculo, mas pode se estender desde a região marginal cefálica até o haptor. 38 Figura 4 Desenhos de 01 - 03. Espécies Anacanthorus sp. (holótipo, ventral). Todas as figuras são apresentadas na escala de 50 micrômetros Fonte: (TAKEMOTO et al., 2004). 39 Figura 5 Desenho de 04 a 16. Estruturas esclerotizadas de Anacanthorus sp. Figuras 4 a 6. 1 a 4. Órgão copulatório masculino. 5. Gancho. 6. 4A. Figuras 7 - 9. 7, Órgão copulatório masculino. 8, Gancho. 9. 4A. Figuras 10-12. 10. Órgão copulatório masculino. 11. Gancho. 12. 4A. Figuras 13-16. 13-14, Órgão copulatório masculino. 15, Gancho. 16. 4A. Todas as figuras são representadas em escala de 10 micrômetros Fonte: (TAKEMOTO et al., 2004). 2.7.3 Gênero Mymarothecium Kritsky, Boeger e Jégu (1996) MONOGENEA Bychowsky (1937) DACTYLOGYRIDEA Bychowsky (1937) 40 DACTYLOGYRIDAE Bychowsky (1933) ANCYROCEPHALINAE Bychowsky (1937) Mymarothecium Kritsky, Boeger e Jégu (1996) Descrição do gênero Mymarothecium (Figura 5), Kritsky, Boeger e Jégu (1996), parasito de brânquias de espécies de peixes pertencentes à família Serrasalmidae (Characiformes), segundo Kritsky, Boeger e Jégu (1996); Thatcher (2006): Corpo fusiforme dividido em região cefálica, tronco, pedúnculo e haptor. Tegumento fino e liso, com anulações escaladas. Quatro lobos cefálicos, dois terminais e dois laterais; órgãos da cabeça presentes. Glândulas cefálicas unicelulares presentes. Quarto ocelos; grânulos dos ocelos ovais presentes ou ausentes. Boca subterminal e medioventral. Faringe bulbosa, glandular e muscular, uma subunidade. Esôfago curto. Cecos intestinais confluentes posteriores ao testículo, sem divertículo. Haptor sub-hexagonal, com o complexo âncora/barra ventral e dorsal. Ganchos dactilogirídeos com o pedúnculo em duas porções claramente definidas; 14 ganchos similares com distribuição ancirocefaline (4 dorsais e 10 ventrais); ganchos com a ponta delicada, polegar saliente, haste expandida compreendendo duas subunidades com a subunidade proximal de comprimento variável entre os pares de gancho; laço do filamento do gancho que se estende até a união das subunidades da haste. Dois pares de âncoras bem definidos. Âncora ventral com eixo, ponta e raízes bem definidas. Âncora dorsal com eixo, ponta e base composta por duas raízes. Barra ventral em forma de haste com projeções medianas, posterior e anterior, presentes ou ausentes. Barra dorsal ligeiramente em forma de U ou em forma de haste; com projeção anterior, presente ou ausente, e a projeção posterior ausente. Gônadas sobrepostas, entre os cecos intestinais; testículo dorsal ao ovário; ovário oval ou alongado, sólido. Canal deferente aparentemente enlaçado no ceco intestinal esquerdo. Vesícula seminal, dilatação sigmoide do canal deferente. Dois reservatórios prostáticos; pequeno, 41 arredondado a oval. Complexo copulatório constituído pelo OCM e peça acessória; OCM reto ou ligeiramente curvado. Peça acessória articulada diretamente ao OCM ou articulada a esse por um ligamento copulatório. Vagina não esclerotizada, dilatada, muscular, com a abertura na superfície médio-dorsal, dorsal à direita ou ventral à direita próximo à região mediana do tronco. Receptáculo seminal fusiforme ou ausente. Poro genital medioventral próximo à bifurcação dos cecos intestinais. Figura 6 Desenho de 22-31. Mymarothecium sp. na Figura 22. Holótipo (vista ventral). 23. Gancho par 1. 24. Gancho par 2. 25. Gancho par 2. 26. Gancho par 2. 27. Órgão copulatório masculino. 28. Barra ventral. 29. Barra dorsal. 30. Âncora dorsal. 31. Âncora ventral Fonte: (TAKEMOTO et al., 2004). 42 2.8 Bactérias As bactérias que causam perdas econômicas de importância para a piscicultura são consideradas oportunistas. Estão presentes na água e na microbiota dos peixes e desencadeiam enfermidades quando o hospedeiro encontra-se debilitado em decorrência de alguns fatores. Entre os quais, podemos ressaltar o estresse provocado por alterações na qualidade da água, associados à elevada densidade de estocagem de peixes, favorecendo o aumento de populações bacterianas e outros agentes patogênicos ou oportunistas (EIRAS et al., 2012;. As bactérias constituem importantes patógenos na piscicultura intensiva, devido a sua facilidade de disseminação e por apresentarem um caráter oportunista. Embora existam inúmeras bactérias patogênicas, algumas delas são de ocorrência frequente e apresentam maior impacto econômico na produção comercial de peixes cultivados, como: Aeromonas spp, Edwardsella spp, Flavobacterium columnare, Francisella spp, Streptococcus spp. (LEIRA et al., 2015). Os peixes podem ser portadores de agentes etiológicos sem, contudo apresentar sintomas clínicos, podendo ocorrer uma proliferação se houver alteração nas condições ambientais ou no hospedeiro. A combinação de um agente infeccioso e o estresse provocado pelos fatores ambientais causa a progressão da enfermidade e morte (TAVARES-DIAS, 2011). A intensificação dos cultivos representa um dos principais fatores estressantes para os peixes, contribuindo para a permanência e disseminação do agente no ambiente, principalmente quando associada a variações abruptas nos parâmetros de manejo a que estão acostumadas (TAVARES-DIAS, 2011). Enfermidades bacterianas em peixes são comuns em sistemas aquáticos, porém práticas de manejo adequadas podem prevenir mortalidades. Para que um 43 diagnóstico preciso e confiável seja realizado, é necessária a contribuição do piscicultor, no sentido de fornecer dados corretos sobre o sistema de criação, manejo empregado, espécies trabalhadas, tratamentos utilizados, enfermidades já identificadas na propriedade, qualidade da água e, principalmente, enviar amostras de peixes e água adequadas. Dessa forma, o diagnóstico será rápido e as devidas soluções serão em prática para que o problema seja o mais rapidamente resolvido (GOMES; SIMÕES; ARAÚJO-LIMA, 2010). Na tentativa de controlar doenças bacterianas em humanos e na produção animal, aumentou-se, significativamente, o uso indiscriminado de antibióticos para profilaxia e tratamento de doenças, resultando em resistência de bactérias comensais e patogênicas a múltiplos agentes antimicrobianos. Por este motivo, torna-se cada vez maior a preocupação com o desenvolvimento de patógenos resistentes e o potencial risco desta resistência ser transferida a patógenos humanos através da ingestão de produtos e subprodutos animais contaminados, tornando-se um dos principais problemas de saúde pública (GUIDELLI et al., 2011). 2.9 Efeitos dos patógenos sobre o desempenho O fenótipo de um indivíduo é resultante da interação entre o seu genótipo e o ambiente a que este indivíduo é exposto ao longo de sua história de vida. A variação na interação entre genótipos e os diversos fatores ambientais ao longo da trajetória da vida dos indivíduos gera a variabilidade fenotípica, e a ação da seleção natural sobre esta, produz as suas diferenças em aptidão. Adicionalmente, a expressão fenotípica resulta da complexidade dos fatores individuais, seus arranjos dentro de hierarquias e de suas interações (GUIDELLI et al., 2011). 44 Como parte das variáveis ambientais, os parasitas afetam a trajetória ontogenética e influenciam a expressão de inúmeros caracteres fenotípicos de seus hospedeiros como estratégia para sua sobrevivência e transmissão (OMEJI; SOLOMON; OBANDE, 2010). A forma e o grau desses efeitos são determinados pelos caracteres relacionados à virulência, resistência e tolerância e de como esses caracteres afetam a aptidão do hospedeiro. Esses efeitos podem ocorrer desde a vida embrionária até a morte do hospedeiro (OMEJI; SOLOMON; OBANDE, 2010). O desenvolvimento de constante ação e reação entre hospedeiro e parasita ao longo do estabelecimento da associação entre estes resulta em alterações na fisiologia e morfologia do hospedeiro (OGUT; AKYOL; ALKAN, 2005). Adicionalmente, diversos estudos têm demonstrado que esta reorganização fenotípica do hospedeiro pode envolver também diversos aspectos de seu comportamento, alterando a forma como o complexo hospedeiro-parasita interage com o ambiente (EIRAS et al., 2012). Tais alterações refletem respostas ao estresse associado ao parasitismo, de forma a trazer as condições funcionais do hospedeiro para valores o mais próximo possível da condição de homeostase (EIRAS; TAKEMOTO; PAVANELLI, 2010). O acúmulo de evidências de efeitos diretos e indiretos da infecção sugere fortemente que a carga parasitária deve ser um importante determinante do valor adaptativo (fitness) do hospedeiro (GOME; SIMÕES, ARAÚJO-LIMA, 2010). Deste modo, a compreensão de quais são as características fenotípicas do hospedeiro afetadas pelos parasitas, bem como suas consequências sobre a aptidão, é determinante para estabelecer a importância do parasita como agente seletivo dos indivíduos hospedeiros. Para tanto, é necessário compreender como 45 os parasitas se relacionam com diferentes aspectos da organização hierárquica do fenótipo (LEMOS et al., 2007). No paradigma da organização hierárquica do fenótipo, proposto por Lopera-Barreto et al. (2011) e complementado por Martins e Romero (1996), a expressão dos caracteres morfológicos, fisiológicos e bioquímicos (massa corpórea e de seus órgãos constituintes, densidade mitocondrial e atividade de enzimas nas mais diversas vias metabólicas nos diferentes órgãos, quantidade de hemáceas e leucócitos na corrente sanguínea, por exemplo), bem como suas interrelações, dependem da interação entre o genótipo e o meio ambiente em que o indivíduo se encontra e são responsáveis por caracterizar os diferentes aspectos da habilidade de desempenho do organismo (eficiência digestória, metabólica e da defesa imunitária, taxas de crescimento, desempenho locomotor aeróbio e anaeróbio, por exemplo). O desempenho, por sua vez, limita as opções comportamentais do organismo em seu ambiente. O comportamento do individuo é responsável, por sua vez, pela sua sobrevivência (sucesso nas disputas por obtenção de recursos energéticos, uso de diferentes padrões de defesa antipredatórias, por exemplo) e reprodução (sucesso nas disputas intra e/ou intersexual na obtenção de acasalamentos), afetando sua aptidão. A partir desse pressuposto, a organização hierárquica do fenótipo pode ser dividida em um gradiente de desempenho (influência dos caracteres morfológicos, fisiológicos e bioquímicos no desempenho do indivíduo) e um gradiente de aptidão (influência do desempenho no comportamento e aptidão do indivíduo) e, a partir desta divisão, mostrar a atuação da seleção natural sobre os indivíduos e os padrões de coevolução entre os diferentes aspectos morfológicos, fisiológicos e comportamentais que integram o fenótipo (MORAIS et al., 2009). Os parasitas e bactérias, juntamente com os efeitos no gradiente de desempenho, podem afetar caracteres relacionados ao comportamento dos hospedeiros que é fundamental para os caracteres de forrageamento como, por 46 exemplo, busca de alimentos, defesa antipredatória e comportamento reprodutivo (MORAIS et al., 2009). Essas alterações comportamentais estão relacionadas, geralmente, aos danos parasitários nos órgãos infectados, comprometendo o funcionamento normal do órgão. Outro fator são as alterações nos níveis nutricionais do hospedeiro, tanto de energia como de materiais, pela competição e queda da eficiência de assimilação de nutrientes e anorexia. Outra possibilidade são as modulações parasitárias nos sistemas neuroendócrinos do hospedeiro que ocorrem, principalmente, nas relações entre parasitas e hospedeiros intermediários (SANTOS; SANTOS, 2005). Estudos com peixes e répteis têm mostrado como infecções parasitárias alteram os níveis de atividades do hospedeiro e como isso se relaciona com a busca de alimentos e a defesa antipredatória. Omeji, Solomon e Obande (2010) mostraram que metacercárias (Diplostomum spathaceum) alojadas na retina podem prejudicar a acuidade visual de peixes, aumentando o tempo por busca de alimentos, levando a uma redução na eficiência alimentar e aumentando o risco dos indivíduos serem predados, tanto pelo aumento do tempo gasto forrageando quanto pela redução da resposta de fuga. 47 3 CONSIDERAÇÕES GERAIS Em pisciculturas, os parasitas e bactérias que acometem os peixes, destacam-se como importantes redutores da produtividade, pois provocam atraso no crescimento dos peixes e altas taxas de mortalidade. A suscetibilidade dos peixes aos patógenos varia em função da espécie de peixe cultivada, de individuo para individuo e das condições ambientais. A suscetibilidade, também, aumenta quando as condições de qualidade das águas são inadequadas. Parasitos podem ser encontrados em todos os órgãos dos peixes, entre eles, as brânquias, causando alterações estruturais graves. As brânquias são estruturas de vital importância no metabolismo e homeostase dos peixes, visto que as parasitoses nesse órgão podem trazer comprometimento nas trocas gasosas, afetando a saúde do animal. Ao longo dos anos, a produção de peixes vem se consolidando e ocupando maior espaço no mercado. Paralelamente a este aumento, a intensificação dos sistemas de produção demonstra que a produção fundamentada exclusivamente no rápido crescimento do animal não é suficiente para manter a atual produtividade sem afetar o meio e a resistência orgânica dos peixes, gerando impactos ambientais e econômicos em toda a cadeia produtiva. Para contribuir com a descrição de achados parasitários em brânquias de peixes de água doce, neste trabalho, brânquias de Pacus, Pirapitingas, Tambaquis e seus Híbridos parasitados por monogenea foram colhidas e estudadas. 48 REFERÊNCIAS ABDALLAH, V. D.; AZEVEDO, R. K.; LUQUE, J. L. Ecologia da comunidade de metazoários parasitos do tamboatá Hoplosternum littorale (Hancock 1828) (Siluriformes: Callichthyidae) do rio Guandu, estado do Rio de Janeiro, Brasil. Acta Scientiarum. Biological Sciences, Maringá, v. 28, n. 4, p. 413-419, out./dez. 2006. ALCÂNTARA, P. F.; OLIVEIRA, A. A.; NOBRE, M. I. S. N. Considerações sobre a amostragem da pirapitinga, Colossoma brachypomum, Cuvier, no estado do Ceará (Brasil). Ciências Agronômicas, Fortaleza, v. 21, n. 1/2, p. 43-49, jun./dez. 1990. ALLENDORF, F. W.; WAPLES, R. S. Conservation and genetics of salmonid fishes. In: AVISE, J. C.; HAMRICK, J. L. (Ed.). Conservation genetics: case histories from nature. 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ZANOLO, R.; YAMAMURA, M. H. Parasitas em tilápias-do-nilo criadas em sistema de tanques rede. Semina: Ciências Agrárias, Londrina, v. 27, n. 2, p. 281-288, abr./jun. 2006. ZORRO, A. et al. Determinação da lipoperoxidação em óleo alimentar. Revista Lusófona de Ciência e Medicina Veterinária, Lisboa, v. 5, n. 15, p. 39-42, ago. 2012. 56 SEGUNDA PARTE - ARTIGOS ARTIGO 1 Susceptibilidade a parasitas monogenéticos em Serrasalminídeos Matheus Hernandes Leira * Aline Assis Lago Mirian Silva Braz Adriana Mello Garcia Adriano Carvalho Costa Rilke Tadeu Fonseca de Freitas Artigo formatado de acordo com a NBR 6022 (ABNT, 2003). * matheushernandes@uol.com.br, Médico Veterinário e Mestre em Ciência Animal - Doutorando em Ciências Veterinárias, Universidade Federal de Lavras. Professor do curso de Medicina Veterinária - FACICA 57 RESUMO O desenvolvimento das atividades relacionadas à aquicultura tem aumentado consideravelmente a relevância dos estudos sobre parasitas e outros patógenos de organismos aquáticos, principalmente, daqueles hospedeiros com potencial para o cultivo e comercialização. O objetivo deste estudo foi avaliar a ( susceptibilidade ) ocorrência de infecções por monogenéticos em pacus, tambaquis e pirapitingas e seus híbridos paquis, pirapicus e, também, indivíduos Pós F1.Os animais foram cultivados por 10 meses em sistema de recirculação fechado. As necrópsias foram realizadas com remoção total das brânquias. Essas foram analisadas a fresco e as positivas para monogenéticos foram fixadas em formol a 5%. Os parasitos foram removidos dos filamentos branquiais com o auxílio de um microscópio estereomicroscópio. Os monogenéticos presentes nas brânquias de cada peixe, foram quantificados e 10 exemplares de cada amostra foram submetidos ao preparo de lâminas para identificação dos gêneros. Nenhum peixe coletado apresentou sinais clínicos de infecções parasitárias. Durante a realização das analises parasitológicas das brânquias, foram identificados dois gêneros de monogenéticos Anacanthorus sp. e Mymarolhecium sp.. O pacu e os híbridos pirapicu e Pós F1 foram os animais mais resistentes. Palavras-chave: Monogenéticos. Brânquias. Piaractus mesopotamicus. Coossoma macropomum. Piaractus brachyopoms. 58 1 INTRODUÇÃO A aquicultura mundial cresce mais que qualquer outro setor de atividade primária. Entre os fatores está o aumento da população e a demanda por alimentos saudáveis e ricos em nutrientes (BORGHETTI; OSTRENSKY; BORGHETTI, 2003; OLIVEIRA FILHO et al., 2010). Em 2010, a produção aquícola nacional foi de 479.399, representando um incremento de 15,3% quanto à produção de 2009, havendo um evidente crescimento do setor no país, com um incremento de 31,2% na produção durante o triênio 2008-2010 (BRASIL, 2013). O Brasil tem feito grandes progressos na investigação de desenvolvimento de novas técnicas de cultivo para os peixes, promovendo um aumento no número de espécies de peixes que podem ser criados na aquicultura. Dentre as espécies cultivadas destacam-se os peixes redondos. O tambaqui é o segundo peixe mais cultivado no país (BRASIL, 2012). A produção de pacu, tambaqui e pirapitinga e seus híbridos tem apresentado uma tendência crescente nas pisciculturas brasileiras. Nas espécies nativas, ainda existe uma hibridação descontrolada no Brasil, na tentativa de melhorar a produção (BRASIL, 2012). Hibridação interespecífica foi usada em explorações piscícolas para produzir animais com melhor desempenho do que as espécies parentais (vigor híbrido), que inclui melhorias nas características tais como uma melhor qualidade da carne, menor taxa de conversão alimentar, crescimento rápido e a resistência aos agentes patogénicos (BEKELE; HAILEMARIAM, 2010). 59 A composição da fauna parasitária de peixes, em geral, depende da localização geográfica, da estação do ano, das características da água, da fauna presente naquele habitat, entre muitos outros fatores (DOGIEL, 1970). As patogenicidades em peixes têm aspectos diferentes dependendo do habitat, o qual pode ser de ambiente natural ou de criação (OBIEKEZIE; TAEGE, 1991). Parasitos podem ser encontrados em todos os órgãos dos peixes, entre eles, as brânquias, podendo causar desde pouco ou nenhum prejuízo até alterações estruturais graves, como observado por Tavares-Dias et al. (2001) e Takemoto et al. (2004), em peixes de criação e de rio, respectivamente. As brânquias são estruturas de vital importância no metabolismo e homeostase dos peixes e as parasitoses, nesse órgão, podem trazer comprometimento nas trocas gasosas e iônicas, afetando a saúde do animal (ROBERTS, 2001). Na literatura, há vários relatos sobre a ocorrência de parasitas em pacus e pirapitingas, no entanto, não há dados sobre o parasitismo no híbrido patinga, provavelmente, por ser uma linhagem relativamente recente (EIRAS; TAKEMOTO; PAVANELLI, 2010). Estudos comprovam que o pacu é hospedeiro natural de monogenoides da espécie Anacanthorus penilabiatus (PAVANELLI; EIRAS; TAKEMOTO, 2008), e Mymarothecium viatorum (COHEN; KHON, 2005). Em pacus cultivados, tem sido relatada a ocorrência de Anacanthorus penilabiatus, A. spathulatus, Urocleidoides sp. e M. viatorum (URBINATI; GONÇALVES; TAKAHASHI, 2010). Em pirapitingas, também, já foi registrada a ocorrência de A. penilabiatus e M. viatorum (COHEN; KHON, 2005). 60 No entanto, poucos estudos têm sido realizados para determinar se híbridos possuem tais características desejáveis em relação ao parental o que pode influenciar a escolha das espécies na produção (FRANCESCHINI et al., 2013). O presente trabalho objetivou-se em identificar e analisar a carga parasitária nas espécies redondas e seus híbridos, em sistema de produção fechado, bem como a suscetibilidade da carga parasitária em relação aos grupos genéticos. 61 2 MATERIAL E MÉTODOS 2.1 Local Os dados utilizados são oriundos de um experimento realizado na estação de piscicultura da Universidade Federal de Lavras, com duração de 10 meses de experimento. O ensaio experimental foi conduzido em um laboratório de recirculação de água, provido com 16 caixas d’água, com capacidade de 500 litros. Este sistema é composto por biofiltro, sonda pt 100, controlador de temperatura (n540) e uma bomba (1/3 cv da somar). Os animais foram distribuídos aleatoriamente nas 16 caixas d’água do sistema de recirculação, sendo duas caixas por grupo genético em uma densidade de seis animais por caixa. O sistema de recirculação foi controlado para que houvesse três renovações totais a cada hora e a temperatura mantida a 28°c durante todo o período experimental. Os animais foram alimentados ad libitum com ração comercial com 32% de proteína bruta, ofertada três vezes ao dia até atingirem 100 gramas de peso vivo (8, 12 e 16 horas) e, duas vezes ao dia, após esta faixa de peso (8 e 14 horas). O oxigênio dissolvido foi monitorado diariamente e a amônia, nitrito, nitrato e ph, a cada três dias, aos 180 dias de idade os animais foram contabilizados dentro das caixas. 62 2.2 Obtenção dos grupos genéticos Foram adquiridos 96 juvenis de Serrasalminae de duas pisciculturas comerciais do estado de São Paulo, sendo informado pelos fornecedores que havia 12 juvenis (30 dias de idade) de cada um dos seguintes grupos genéticos (espécies e seus híbridos): pacu, pirapitinga, tambaqui, paqui (♀pacu x ♂tambaqui), tambacu (♀tambaqui x ♂pacu). Foram coletadas amostras de DNA dos animais para analises molecular com a finalidade de se obter a confirmação das espécies e dos grupos híbridos. As analises moleculares foram realizadas na Universidade Estadual Paulista "Julio de Mesquita Filho" (UNESP), no Laboratório de Genética de Peixes (LAGENPE), seguindo a metodologia de Hashimoto et al. (2012). 2.3 Identificação dos parasitas Para as análises parasitológicas, os animais foram encaminhados ao Laboratório de Helmintologia, Departamento de Medicina Veterinária, da Universidade Federal de Lavras (UFLA). Primeiramente os animais passaram por exames clínicos. Em seguida, foram obtidos os dados de peso corporal (g) e comprimento padrão (cm). Foram realizadas as necrópsias dos peixes onde foram feitas incisões abaixo do opérculo para a remoção total das brânquias segundo Jerônimo et al. (2012). O órgão foi removido e colocado em placas de petri identificadas para imediato exame a fresco dos filamentos branquiais feito entre lâmina e lamínula, 63 utilizando solução salina (0,85% NACL), sob microscópio óptico para verificar a presença de parasitos. Os arcos branquiais, depois de examinados, quando positivos, foram colocados em frascos etiquetados contendo formol a 5%. Após a fixação dos parasitos, eles foram removidos dos filamentos branquiais com o auxílio de um microscópio estereomicroscópio e quantificados. Os monogenéticos presentes nas brânquias de cada peixe foram quantificados e 10 exemplares de cada amostra foram encaminhados para o preparo de lâminas em meio de Hoyer’s (EIRAS; TAKEMOTO; PAVANELLI, 2006), para o estudo das estruturas esclerotizadas, como ganchos, âncoras e barras do haptor e complexo copulatório, importantes na identificação dos gêneros e espécies desse grupo. As espécies de monogênea, encontradas em Piaractus mesopotamicus, Piaractus brachyopomus, Colossoma macropomum e nos peixes híbridos das espécies citadas, foram identificadas de acordo com Eiras, Takemoto e Pavanelli (2006); Kritsky, Boeger e Jégu (1996); Kritsky; Boeger; Van Every (1992); Thatcher (2006). 2.4 Cálculo dos parâmetros parasitológicos Com base na quantificação, foram estabelecidas a intensidade de parasitismo e ocorrência de parasitos. A intensidade de parasitismo ou carga parasitária foi definida como o número total de parasitos, de cada espécie, dividido pelo número de hospedeiros. A ocorrência, que á razão entre o número de hospedeiros infectados e o número de hospedeiros examinados, foi calculada de acordo com Bush et al. (1997). 64 A prevalência mede quantos animais estão doentes, incidência mede quantos animais tornaram-se doentes. Ambos os conceitos envolvem espaço e tempo – quem está ou ficou doente num determinado lugar numa dada época. A prevalência foi calculada segundo a fórmula: prevalência = número de peixes infectados / número de peixes examinados x 100 e a intensidade média = número de parasitos / número de peixes parasitados. Abundância média=número total de parasitos/número total de peixes da amostra. O Fator de condição (Fc) utilizado foi o Fulton, com a seguinte fórmula: Fc=P/CT 3 (P: peso e CT: comprimento padrão) (BUSH et al., 1997). 2.5 Análises estatísticas As análises estatísticas foram realizadas por meio do software R versão 3.1.1 (R CORE TEAM, 2014). Para avaliação da carga parasitária, intensidade média e abundancia foi utilizada a função kruskal() da biblioteca agricolae (MENDIBURU, 2015), para a realização do teste de Kruskal-Wallis e comparação múltipla para dados não paramétricos a 5% de significância. O coeficiente de correlação de Spearman (rs) foi usado para verificar a correlação entre a carga parasitária, peso