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Título: Indução de haploides e duplicação cromossômica em milho
Autor(es): Couto, Evellyn Giselly de Oliveira
Orientador: Pinho, Édila Vilela de Resende Von
Membro da banca: Pinho, Renzo Garcia Von
Veiga, Adriano Delly
Área de concentração: Biotecnologia Vegetal
Assunto: Milho - Duplo-haploides
Milho - R-navajo
Milho - Colchicina
Zea mayz
Double-haploid
Colchicines
Data de Defesa: 16-Jul-2013
Data de publicação: 25-Set-2013
Agência de Fomento: Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (Fapemig)
Referência: COUTO, E. G. de O. Indução de haploides e duplicação cromossômica em milho. 2013. 104 p. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia Vegetal) – Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2013.
Resumo: A tecnologia de obtenção de linhagens duplo-haploides é uma forma de reduzir tempo e espaço na obtenção de linhagens endogâmicas nos programas de melhoramento de milho. Métodos de duplicação cromossômica têm sido testados e publicados, entretanto, muitos protocolos utilizados no setor privado não são publicados. Nos experimentos com haploides duplicados em milho, diversas metodologias têm sido utilizadas na avaliação e identificação da duplicação cromossômica, dentre elas destacam-se a citometria de fluxo, marcadores de DNA e viabilidade polínica. Objetivou-se neste trabalho analisar a capacidade do indutor de haploidia gimnogenético KEMS em clima tropical; verificar se a origem do germoplasma interfere na taxa de indução e duplicação de haploides; avaliar dois protocolos e verificar a eficiência de duplicação cromossômica; aferir a capacidade das técnicas de citometria de fluxo e marcadores moleculares SSR na verificação da duplicação cromossômica, e avaliar a viabilidade polínica dos duplo-haploides obtidos. A linhagem indutora de haploidia KEMS foi utilizada como parental masculino e cruzada com quatro híbridos (GNS3225, GNS3032, GNS3264 e DKB393). As sementes provenientes desse cruzamento foram selecionadas por meio do marcador Rnavajo. Dois protocolos distintos foram utilizados. No primeiro, plântulas foram imersas em solução de colchicina 0,04% e de DMSO 0,5% por 12 horas, e no segundo, raízes foram imersas em solução de colchicina 0,1%, DMSO 0,5% e Tween 20 0,1%, por 6 horas. As plântulas duplicadas foram levadas para casa de vegetação. Após 14 dias de duplicação, amostras das plantas foram avaliadas pela técnica de citômetria de fluxo, e posteriormente, transplantadas para o campo. No campo foram coletadas amostras para análises de marcadores microssatélites e viabilidade polínica. Os protocolos utilizados apresentaram diferenças significativas na duplicação cromossômica, sendo o protocolo 2 mais eficiente. A linhagem indutora KEMS pode ser utilizada em clima tropical, uma vez que induziu haploides em porcentagem superior ao que se observa para essa indutora. Os híbridos utilizados interferiram na taxa de indução de haploides. Outros marcadores, além do R-navajo devem ser utilizados na identificação de haploides. As técnicas de citometria de fluxo, marcadores microssatélites e viabilidade polínica permitiram identificar e caracterizar as plantas duplicadas. Neste trabalho foram obtidas 25 linhagens duplo-haploides.
The technology for obtaining double haploid lines is one way of reducing time and space in maize breeding programs. Methods of chromosome doubling have been tested and published, however, many protocols used in the private sector are not published. In experiments with double haploids in maize, various methodologies have been used in the evaluation and identification of chromosome duplication. Among them stand out flow cytometry, DNA markers and pollen viability. The aim of this study was to analyze the ability of the gimnogenetic haploidy inducer KEMS in tropical conditions; verify whether the source of germplasm interfere in the rate of induction of haploid and duplication; evaluate two protocols and verify the efficiency of chromosome doubling, assess the capacity of flow cytometry and SSR markers on checking chromosome doubling and evaluating the pollen viability of double-haploids. The haploid inducer KEMS was used as male parent and crossed with four hybrids (GNS 3225, GNS 3032, GNS 3264 and DKB 393). The seeds from this cross were selected by the marker system of R-Navajo. Two different protocols were used. In the former, seedlings were immersed in 0.04% colchicine and 0.5% DMSO solution for 12 hours, and in the second roots were immersed in a solution with 0.1% colchicine, 0.5 % DMSO and Tween 20 0.1%, for 6 hours. The duplicated seedlings were taken to the greenhouse. After 14 days, samples of the plants were assessed by flow cytometry and subsequently transplanted to the field. In the field samples were collected for the microsatellite markers analysis and pollen viability. The protocols showed significant differences in chromosome doubling, being the protocol 2 the most efficient. The inducer KEMS can be used in tropical conditions since haploid induction percentage was higher than rates already observed. The hybrids used interfered the haploid induction rate. Other markers in addition to the R-Navajo must be used in the identification of haploids. The techniques of flow cytometry, pollen viability and microsatellite markers allowed the identification and characterization of plants duplicate. In this work 25 double haploid lines were obtained.
Informações adicionais: Dissertação apresentada à Universidade Federal de Lavras, como parte das exigências do Programa de Pós- Graduação em Biotecnologia Vegetal, área de concentração em Biotecnologia Vegetal, para a obtenção do título de Mestre.
URI: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/1159
Publicador: UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
Idioma: pt_BR
Aparece nas coleções: PPBV - Biotecnologia Vegetal - Mestrado (Dissertações)

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