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metadata.teses.dc.title: Caracterização molecular e fenotípica de Staphylococcus coagulase negativos isolados de mastite bovina
metadata.teses.dc.title.alternative: Molecular and phenotypical characterization of coagulase negative Staphylococcus isolated from bovine mastitis
metadata.teses.dc.creator: Custódio, Dircéia Aparecida da Costa
metadata.teses.dc.creator.Lattes: http://lattes.cnpq.br/2054290590364926
metadata.teses.dc.contributor.advisor1: Costa, Geraldo Márcio da
metadata.teses.dc.contributor.advisor-co1: Dorneles, Elaine Maria Seles
metadata.teses.dc.contributor.referee1: Costa, Geraldo Márcio da
metadata.teses.dc.contributor.referee2: Dorneles, Elaine Maria Seles
metadata.teses.dc.contributor.referee3: Piccoli, Roberta Hilsdorf
metadata.teses.dc.contributor.referee4: Carvalho-Castro, Glei dos Anjos
metadata.teses.dc.subject: Staphylococcus coagulase negativa (SCN)
Virulência
Infecção intramamária
Doenças de bovinos
Genes de virulência
Caracterização
Coagulase-negative Staphylococci (CoNS)
Virulence
Intrammamary infection
Bovine diseases
Virulence genes
Characterization
metadata.teses.dc.date.issued: 8-May-2019
metadata.teses.dc.description.sponsorship: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
metadata.teses.dc.identifier.citation: CUSTÓDIO, D. A. da C. Caracterização molecular e fenotípica de Staphylococcus coagulase negativos isolados de mastite bovina. 2019. 55 p. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias)–Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2019.
metadata.teses.dc.description.resumo: Staphylococcus coagulase negativa (SCN) constituem um grupo heterogêneo de bactérias que apresentam grande importância na etiologia da mastite bovina, especialmente em rebanhos nos quais as infecções por Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae foram controladas. Considerando a importância crescente que estes agentes apresentam na etiologia da mastite em rebanhos brasileiros, é de grande relevância a identificação precisa dos isolados e a caracterização dos mesmos quanto aos fatores de virulência envolvidos nas infecções intramamárias e quanto à resistência aos antimicrobianos e antissépticos. Diante disto, o presente estudo teve como objetivos: 1) identificar os isolados de SCN pela técnica de espectrometria de massas por ionização (MALDI-TOF); 2) fazer a prospecção dos genes que codificam as enterotoxinas A-E, (sea, seb, sec, sedesee); as hemolisinas alfa e beta (hla e hlb) e dos genes envolvidos na expressão de biofilme (icaAD); 3)Detectar fenotipicamente a produção de hemolisinas alfa e beta e a produção de biofilme. Para o estudo foram selecionadas 123 cepas isoladas de casos de mastite bovina em rebanhos da região sul de Minas Gerais. Para a realização dos testes moleculares, foi realizada a extração e purificação do DNA bacteriano pelo método de guanidina. A pesquisa dos genes codificadores para hemolisinas e enterotoxinas foi realizada por meio da PCR multiplex e do gene icaAD por meio da PCR simplex. A produção de biofilme in vitro foi avaliada por meio do cultivo dos isolados em ágar vermelho congo e a produção de hemolisinas alfa e beta pelo cultivo dos mesmos em agar sangue contendo 5% de sangue de carneiro. Os testes de resistência a antimicrobianos e antissépticos foram realizados por meio da técnica de CIM (concentração inibitória mínima). Oito espécies de SCN foram identificadas neste estudo pela técnica de MALDI-TOF. A espécie mais frequente foi Staphylococcus chromogenes (71,55%), seguida de S. hyicus (7,32%), S. aureus (4,88%), S. epidermidis (4,88%), haemolyticus (4,06%), S. warneri (3,25%), S. simulans (3,25%) e S. saprophyticus (0,81%). Os resultados dos testes moleculares demonstraram que todos isolados foram negativos para os genes codificadores das enterotoxinas A-E e que 7,31% dos mesmos apresentaram o gene IcaAD. Quanto aos genes relacionados à expressão de hemolisinas (hla e hlb), seis isolados (4,88%) possuíam os dois genes enquanto78,86% dos isolados foram negativos para ambos os genes;16,26% apresentaram o gene hla isoladamente e nenhum apresentou somente o gene hlb. Em relação à produção de biofilme in vitro, 84,55% dos isolados foram positivos para o teste. Quanto à expressão de hemolisinas in vitro, 78,86% dos isolados foram negativos. Os resultados dos testes de suscetibilidade demonstraram que a maior parte dos antissépticos apresentou ação inibitória contra os isolados de SCN, exceção para o glutaraldeído, com 80,49% dos isolados resistentes na concentração de 2%. Em relação à suscetibilidade a antimicrobianos antibióticos, os testes de CIM demonstraram a existência de 44 perfis de suscetibilidade entre os isolados de SCN e a ocorrência do fenômeno da multiressistência em parcela expressiva da população estudada. O presente trabalho traz contribuições importantes para conhecimentos sobre o perfil epidemiológico, características de virulência e de resistência de SCN envolvido na etiologia da mastite bovina em rebanhos brasileiros.
metadata.teses.dc.description.abstract: Coagulase-negative Sthapylococci (CNS) is a heterogeneous bacterial group that has high importance in bovine mastitis etiology, especially in herds in which the Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae infections were controlled. The accurate identification and the characterization of these pathogens are extremely relevant because of its high importance in Brazilian herds.,. At that, the present study aimed: 1) to identify the CNS isolates using the Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight (MALDI-TOF); 2) to verify the presence of enterotoxins genes (sea, seb, sec, sede see), alfa and beta hemolysin genes (hla e hlb) and biofilm gene (icaAD); 3) to evaluate phenotypically the alfa and beta hemolisins and biofilm productions, and 4) to evaluate the antimicrobial and antisseptic susceptibility profiles of strains. For these purposes, were used 123 CNS strains isolated from milk of cows with mastitis, from Minas Gerais south region. The DNA extraction was performed by guanidine method. Multiplex PCR was used to verify the presence of genes related to hemolysin and enterotoxins expression, and single plex PCR to IcaAD gene. In vitro biofilm production was evaluate by culture of strains in Red Congo agar and the hemolysin production by culture in 5% sheep blood agar. The antimicrobial and antisseptic tests were performed using the minimum inhibitory concentration (MIC) technique according to CLSI (2018). Eight species of CNS were identified by MALDI-TOF. The most frequent specie was Staphylococcus chromogenes (71.55%), following by S. hyicus (7.32%), S. aureus (4.88%), S. epidermidis (4.88%), S. haemolyticus (4.06%), S. warneri (3.25%), S. simulans (3.25%) e S. saprophyticu s (0.81%). The molecular tests showed that all isolates were negative to enterotoxins genes and that 7.31% were positive to icaAD gene. PCR tests showed that 78.86% of the isolates were negative to hemolysin genes hla and hlb and 4.88% was positive to both genes; 16.26% were positive only to hla and none isolate was positive only to hlb. In vitro phenotypic tests to biofilm and hemolysin productions showed that 84.55% of the isolates were positive to biofilm and that 78.86% of strains did not showed hemolytic activity. The antisseptic susceptibility tests demonstrated 100% of susceptibility to all antiseptics, except glutaraldehyde, in which 80.49% of the isolates were resistant in concentration of 2%. Antimicrobial susceptibility tests results showed 44 resistance profiles and the multidrug resistance phenomenon was observed in expressive proportion of the population studied. This study presents important contributions about epidemiology, virulence, and resistance profiles of CNS associated with bovine mastiti s in Brazilian herds.
metadata.teses.dc.identifier.uri: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/34242
metadata.teses.dc.publisher: Universidade Federal de Lavras
metadata.teses.dc.language: por
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