dissertação

Identificação de recombinantes de Glomerella cingulata f. sp. phaseoli por meio de marcadores de RAPD

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Resumo

The wide existent genetic variability in relation to the patógeno Colletotricum lindemuthianum has intrigued the researchers, since the perfect form is not common in the nature. Of this it sorts out the objective of this work it was: to evaluate through markers RAPD the capacity of lineages of the fungus Glomerella cingulata f. sp. Phaseoli (it forms perfect of C. lidemuthianum) in forming crossbreeds. This study was accomplished at the Resistance Laboratory and in the Laboratory of Molecular Genetics of the Federal University of Lavras, during the period from 2002 to 2003. The lineages 42, 20, B1, B2, B3, B4, B5 and B6 were used. Crossings in all the possible combinations were accomplished in petri plate with middle of culture M3, after the growth of the colonies and the formation of the contact line among the lineages, it was observed through microscope (Leica AC 2000) the presence or not of fertile perithecium. That combination with larger production of ascus was considered maintained for sequence of the work. The spores were micro-manipulated and soon after put to grow in half liquidate M3S, after having developed the same ones they were dehydrated. The mass of dry micélio then can go by a process that made possible the extraction of DNA. In the work they were appraised 5 ascus of the most productive crossing (B1 x 42) and your respective ascóspores. Starting from the matrix originating from of the results RAPD, was proceeded evaluations of genetic similarity by the method of Sorence and Dice and the clustering analysis in the dendrogram form through the method UPGMA. The results evidenced the crossbreeds formation among the considered crossing and it could be observed by the pattern of bands RAPD abnormal segregations.
A ampla variabilidade genética existente em relação ao patógeno Colletotricum lindemuthianum tem intrigado os pesquisadores, sendo que a forma sexuada até o presente momento não foi detectada na natureza. Desta maneira, o objetivo deste trabalho foi avaliar por meio de marcadores RAPD a capacidade de linhagens do fungo Glomerella cingulata f. sp. phaseoli (forma perfeita ou sexuada de C. lidemuthianum) em formar recombinantes. Foram utilizadas as linhagens 40, 42, 20, e os setores da linhagem 20 (B1, B2, B3, B4, B5 e B6). Cruzamentos em todas as combinações possíveis foram realizados em placa de Petri com meio de cultura M3. O cruzamento entre as linhagens 42 x B1 produziu maior quantidade de peritécios, sendo isolados 5 ascos com seus respectivos ascósporos. Procedeu-se a extração de DNA dos genitores e dos descendentes, realizando-se a análise de RAPD. A partir das 62 bandas polimórficas de RAPD obtidas, procedeu-se avaliações de similaridade genética pelo método de Sorence e Dice e a análise de agrupamento na forma de dendrograma através do método UPGMA. Os resultados evidenciaram que: o fungo G. cingulata f. sp. phaseoli é pseudo homotálico; as linhagens 42 e B1 são compatíveis em cruzamento, produzindo peritécios férteis e viáveis; os marcadores RAPD, permitiram identificar recombinantes do cruzamento entre as linhagens 42 e B1 de G. cingulata f. sp. phaseoli, sendo que os 40 ascósporos descendentes apresentaram 63% de similaridade genética com o parental 2 (linhagem 42) e 49% com o parental 1 (linhagem B1).

Abstract

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Genética e Melhoramento de Plantas

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CAMARGO JUNIOR, O. A. Identificação de recombinantes de Glomerella cingulata f. sp. phaseoli por meio de marcadores RAPD. 2004. 60 p. Dissertação (Mestrado em Genética e Melhoramento de Plantas)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2004.

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