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Detection of transgenic events in maize using immunochromatographic strip test and conventional PCR
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Resumo
Com o crescimento do mercado de transgênicos, fazem-se necessárias metodologias rápidas e economicamente viáveis para
detecção de transgenes, tanto para a identificação de contaminação em sementes quanto em grãos. Foram utilizadas sementes de
cultivares comerciais de milho GNZ 2004 convencional, VT-Pro (MON89034), Round up Ready - RR (NK603) e Herculex (TC1507).
Afim de simular diferentes níveis de contaminação, sementes transgênicas foram misturadas às sementes convencionais, nos níveis de
0,2%, 0,4%, 1,0% e 1,6%, para VT-Pro e 0,2%, 0,5%, 0,8% e 1,2%, para RR e Herculex. O teste de tiras foi realizado em semente
inteira, endosperma e embrião. Para a avaliação da especificidade da técnica na detecção do evento TC1507, por meio da técnica de
PCR convencional, foram utilizadas, como controle negativo, sementes do híbrido comercial de milho GNZ 2004 e, como controle
positivo, o híbrido de milho 2B655Hx. Com a finalidade de simular diferentes níveis de contaminação, sementes transgênicas
(TC1507) foram misturadas às sementes convencionais, nos níveis de 10%, 5%, 1%, 0,5% e 0,1%. Sementes de cada amostra foram
trituradas e foi realizada a extração do DNA pelo método CTAB 2%. Utilizando-se a tira imunocromatográfica, foi possível avaliar a
expressão de proteínas referente aos eventos VT-Pro, RR e Herculex, quando da utilização de sementes inteiras com níveis de
contaminação de 0,2%. Foi possível, pela técnica de PCR convencional, detectar o evento TC1507, em amostras com 1% de
contaminação.
Abstract
With the growth in the transgenic market, fast and economically viable methodologies are necessary for undertaking
transgene detection tests, both for identification of contamination in seeds and in grain. Seeds from commercial conventional GNZ
2004, and transgenic VT-Pro (MON89034), Roundup Ready (NK603) and Herculex (TC1507) maize cultivars were used. In
order to simulate different levels of contamination, the transgenic seeds were mixed with conventional seeds at levels of 0.2%,
0.4%, 1.0% and 1.6% for VT-Pro, and 0.2%, 0.5%, 0.8% and 1.2% for Roundup Ready and Herculex. The lateral flow membrane
strip test was performed in the whole seed, endosperm and embryo. For evaluation of the specificity of the technique in detection
of the TC1507 event by means of the conventional PCR technique, seeds of the commercial maize hybrid GNZ 2004 were used
as negative control, and the maize hybrid 2B655Hx as positive control. In order to simulate different levels of contamination,
transgenic seeds were mixed with conventional seeds at the levels of 10%, 5%, 1%, 0.5% and 0.1%. Seeds from each sample were
crushed, and then DNA extraction was performed by the CTAB 2% method. Using the immunochromatographic strip, it was
possible to evaluate the expression of proteins related to the VT-Pro, Roundup Ready and Herculex events when whole seeds
were used at the 0.2% level of contamination, whereas by the conventional PCR technique, it was possible to detect the TC1507
event in samples with 1% contamination.
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CANTELMO, N. F. et al. Detection of transgenic events in maize using immunochromatographic strip test and conventional PCR. Ciência e Agrotecnologia, Lavras, v. 37, n. 5, p. 404-409, Sept./Oct., 2013.
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