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Obtenção de milho transgênico por RNAi resistente ao vírus do mosaico

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Resumo

O Brasil é o terceiro produtor mundial de milho. Entretanto, doenças não consideradas importantes estão ocasionando grandes perdas como é o caso da virose do mosaico causado pelo SCMV. Essa doença pode trazer perdas de até 50%. A busca por cultivares cada vez mais produtivas, resistentes a doenças e adaptadas às mais diversas condições de cultivo pode ser acelerada com a utilização de técnicas como manipulação gênica e transformação. Este trabalho linhagens de milho transgênico resistente ao SCMV foram obtidas pela tecnologia do RNA de interferência (RNAi) . Calos friáveis de milho HiII foram transformados via biobalística usando uma construção baseada em uma região especifica da capa protéica. Plantas T1 de 80 eventos foram testadas contra o vírus durantes 4 semanas consecutivas por inoculação mecânica. Os resultados mostraram que 20% das plantas T1 não apresentaram sintomas. As mesmas plantas foram também testadas contra a sensitividade ao PPT (marcador de seleção). RT-PCR foram feitos para confirmar a presença do vírus nas plantas assintomáticas e para verificação da expressão da construção. Comparação de produtividade será feita assim que linhagens homozigotas copia única forem obtidas. Os resultados obtidos demonstram que a técnica do RNAi é funcional para conferir resistência ao mosaico em plantas transgênicas de milho.

Abstract

Brazil is the third largest maize producer in world. However, currently diseases that were not previously considered important are generating enormous losses such as the mosaic (caused by the SCMV). The crops infected with the virus can drop the productivity up to 50%. The search for more productive varieties, resistant to diseases and adapted to diverse cultivation conditions can be accelerated with techniques such as gene manipulation and transgenic. In this work, mosaic resistant transgenic maize lines were obtained by the RNA interference technology (RNAi). Friable callus of maize HiII were transformed via biolistic using a construction based a specific region on coat protein. T1 plants from 80 events were tested against the virus by 4 weeks consecutive mechanical inoculation. The results showed 20% of the T1 plants with no symptoms. The plants were also tested against sensitivity to PPT (selection marker). RT-PCR were done to confirm the presence of the virus on the asymptomatic plants and the expression the RNAi construction. Productivity comparison with no transgenic plants will be done as soon as homozygous with a single copy transgene is obtained. These results have indicated that the technique of RNAi is useful to generate virus-resistant transgenic maize plants.

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Fisiologia Vegetal

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Coelho, G. T. da C. P. Obtenção de milho transgênico por RNAi resistente ao vírus do mosaico. 2008. 72 p. Tese (Doutorado em Agronomia/Fisiologia Vegetal)–Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2008.

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