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Efeito de crioprotetores, diluidores e osmolalidade na qualidade espermática de Prochilodus lineatus e Brycon orbignyanus

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Resumo

A piracanjuba Brycon orbignyanus e o curimbatá Prochilodus lineatus são peixes Characiformes, nativos da América do Sul, com grande potencial para a aquicultura. No estudo inicial (artigo 1) foram avaliados os efeitos da osmolalidade, diluidores, crioprotetorores (CPAs) e tempo de equilíbrio sobre a motilidade do sêmen fresco de B. orbignyanus e P.lineatus. Vinte e quatro meios numa combinação de seis diluidores (BTS® e glicose a 270, 315 e 360 mOsm/kg), com os CPAs DMSO (Me2SO), metanol, metilglicol (MG) e um controle sem CPA foram preparados.Imediatamente após diluição, as amostras foram observadas em um microscópio de luz para confirmar se a todas as combinações de diluidor-CPA iriam suprimir o inicio da motilidade espermática. A motilidade foi então ativada e avaliada imediatamente após diluição (amostras não-equilibradas) e após um tempo de equilíbrio de 30 min a 4 °C. Em ambas as espécies, a motilidade foi iniciada em todas as amostras diluídas em BTS-270-controle, Glu-270-MG, Glu-270-MG, Glu-270-controle, e em todas as combinações contendo Me2SO. Em piracanjuba, a taxa de motilidade (77-92%) e vigor (3,3-4,7) das amostras não equilibradas não foram significativamente afetados por qualquer parâmetro. Depois de 30 minutos, no entanto, o vigor foi reduzido na maioria das amostras. Em curimbatá, a taxa de motilidade foi significativamente maior nas amostras não-equilibradas (83%) em comparação com amostras equilibradas por 30 min (75%). O vigor das amostras não-equilibradas não foi afetado por nenhum parâmetro (3,3-4,2). No sêmen congelado (artigo 2) foram avaliados os efeitos de CPAsna motilidade espermática, velocidades e integridade de membrana. Foram utilizados seis meio de congelamento compreendendo a combinação de três CPAs (Me2SO, metanol e MG) e dois diluidores (BTS® e glucose). A taxa de motilidade, e as velocidades curvilinear (VCL), média na trajetória (VAP) e linear (VSL) foram avaliadas por meio de um sistema computadorizado de análise do sêmen (CASA). A integridade de membrana foi determinada utilizando os corantes fluorescentes SYBR® 14 e iodeto de propídio. Em B. orbignyanus, foi observada alta qualidade pós-descongelamento apenas em amostras congeladas em BTS-metilglicol; as amostras possuíam VSL de 90 μm/s, VAP de 113 μm/s e 57% de espermatozoides intactos. Em P. lineatus, foi observada alta qualidade pós-descongelamento em amostras congeladas em BTS-metilglicol, glicose-metilglicol e glicose-metanol. O sêmen congelado em Me2SO teve a menor qualidade. Com base nestes resultados, conclui-se que o metilglicol é o CPA mais adequado para B. orbignyanus e P.lineatuse fornece boa proteção da membrana durante o processo de criopreservação.
A piracanjuba Brycon orbignyanus e o curimbatá Prochilodus lineatus são peixes Characiformes, nativos da América do Sul, com grande potencial para a aquicultura. No estudo inicial (artigo 1) foram avaliados os efeitos da osmolalidade, diluidores, crioprotetorores (CPAs) e tempo de equilíbrio sobre a motilidade do sêmen fresco de B. orbignyanus e P.lineatus. Vinte e quatro meios numa combinação de seis diluidores (BTS® e glicose a 270, 315 e 360 mOsm/kg), com os CPAs DMSO (Me2SO), metanol, metilglicol (MG) e um controle sem CPA foram preparados.Imediatamente após diluição, as amostras foram observadas em um microscópio de luz para confirmar se a todas as combinações de diluidor-CPA iriam suprimir o inicio da motilidade espermática. A motilidade foi então ativada e avaliada imediatamente após diluição (amostras não-equilibradas) e após um tempo de equilíbrio de 30 min a 4 °C. Em ambas as espécies, a motilidade foi iniciada em todas as amostras diluídas em BTS-270-controle, Glu-270-MG, Glu-270-MG, Glu-270-controle, e em todas as combinações contendo Me2SO. Em piracanjuba, a taxa de motilidade (77-92%) e vigor (3,3-4,7) das amostras não equilibradas não foram significativamente afetados por qualquer parâmetro. Depois de 30 minutos, no entanto, o vigor foi reduzido na maioria das amostras. Em curimbatá, a taxa de motilidade foi significativamente maior nas amostras não-equilibradas (83%) em comparação com amostras equilibradas por 30 min (75%). O vigor das amostras não-equilibradas não foi afetado por nenhum parâmetro (3,3-4,2). No sêmen congelado (artigo 2) foram avaliados os efeitos de CPAsna motilidade espermática, velocidades e integridade de membrana. Foram utilizados seis meio de congelamento compreendendo a combinação de três CPAs (Me2SO, metanol e MG) e dois diluidores (BTS® e glucose). A taxa de motilidade, e as velocidades curvilinear (VCL), média na trajetória (VAP) e linear (VSL) foram avaliadas por meio de um sistema computadorizado de análise do sêmen (CASA). A integridade de membrana foi determinada utilizando os corantes fluorescentes SYBR® 14 e iodeto de propídio. Em B. orbignyanus, foi observada alta qualidade pós-descongelamento apenas em amostras congeladas em BTS-metilglicol; as amostras possuíam VSL de 90 μm/s, VAP de 113 μm/s e 57% de espermatozoides intactos. Em P. lineatus, foi observada alta qualidade pós-descongelamento em amostras congeladas em BTS-metilglicol, glicose-metilglicol e glicose-metanol. O sêmen congelado em Me2SO teve a menor qualidade. Com base nestes resultados, conclui-se que o metilglicol é o CPA mais adequado para B. orbignyanus e P.lineatuse fornece boa proteção da membrana durante o processo de criopreservação.

Abstract

Descrição

Tese apresentada à Universidade Federal de Lavras, como parte das exigências do Programa de Pós-Graduação em Zootecnia, área de concentração em Produção Animal, para a obtenção do título de Doutor.ARTIGO 1 - Extender composition, osmolality, cryoprotectant and equilibration time effects on fresh sperm motility of two Characiformes fish: piracanjuba (Brycon orbignyanus) and streaked prochilod (Prochilodus lineatus). ARTIGO 2 - Methyl glycol, methanol and Me2SO effects on post-thaw sperm motility, velocities and membrane integrity of Brycon orbignyanus and Prochilodus lineatus (Characiformes)

Área de concentração

Produção Animal

Agência de desenvolvimento

Palavra chave

Marca

Objetivo

Procedência

Impacto da pesquisa

Resumen

ISBN

DOI

Citação

NASCIMENTO, A. F. do. Efeito de crioprotetores, diluidores e osmolalidade na qualidade espermática de Prochilodus lineatus e Brycon orbignyanus. 2013. 88 p. Tese (Doutorado em Engenharia Agrícola)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2013.

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