dissertação

Expressão gênica diferencial por CDNA-RAPD entre cultivares de feijão inoculadas por Sclerotinia sclerotiorum

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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

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Resumo

O conhecimento do perfil transcricional de genótipos sob tratamentos específicos tem sido considerado como ferramenta de grande relevância para a compreensão molecular dos patossistemas, visando o conhecimento da resistência. O feijão é uma das culturas mais importantes da economia brasileira e suscetíveis a patógenos. O mofo branco é uma doença fúngica causada pelo patógeno Sclerotinia sclerotiorum e possui capacidade de reduzir drasticamente a produtividade do cultivo e, em condições favoráveis, essas perdas podem ser irreversíveis. Por isso, este trabalho tentou compreender de forma direta e indiretamente a ação do patógeno frente a cultura do feijão, e teve como objetivos: (i) avaliar ajustes de diferentes protocolos de kits comerciais de extração de RNA Total utilizando hastes de feijão inoculados com o patógeno Sclerotinia sclerotiorum e, (ii) verificar, pela técnica cDNARAPD, a existência de variabilidade de expressão, e obter informações acerca do transcriptoma de cultivares suscetíveis e resistentes ao mofo branco, quando inoculadas pelo agente patogênico. A utilização da técnica RAPD em material expresso, utilizando 57 primers decâmeros, permitiu a visualização de amplificação de 255 locos, sendo que cerca de 136 destes, polimórficos, comprovando assim, a existência de variabilidade de expressão gênica com a identificação de putativos locos de interesse, através das diferenças qualitativas e quantitativas observadas entre os tratamentos inoculados e não inoculados, de ambas as linhagens.

Abstract

The knowledge of the transcriptional profile of genotypes under specific treatments has been considered as a tool of great relevance for the molecular understanding of the patossystems, aiming the knowledge of the resistance. Beans are one of the most important crops of the Brazilian economy and susceptible to pathogens. White mold, a fungal disease caused by the pathogen Sclerotinia sclerotiorum, has the ability to drastically reduce crop yields, under favorable conditions these losses may be irreversible. Therefore, this work tried to understand directly and indirectly the action of the pathogen against the bean culture. Therefore, this study aimed to: (i) evaluate adjustments of different protocols of commercial Total RNA extraction kits using bean stems inoculated with the pathogen Sclerotinia sclerotiorum and, (ii) verify, by the cDNA-RAPD technique, the existence of variability of expression, and to obtain information about the transcriptome of susceptible and white mold resistant cultivars when inoculated by the pathogen. The use of the RAPD technique in express material using 57 decamer primers allowed the visualization of amplification of 255 loci, with about 136 of these polymorphic, thus proving the existence of variability of genetic expression, with the identification of putative loci of interest , through the qualitative and quantitative differences observed between the inoculated and uninoculated treatments of both strains.

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MIRANDA, R. N. de. Expressão gênica diferencial por CDNA-RAPD entre cultivares de feijão inoculadas por Sclerotinia sclerotiorum. 2019. 79 p. Dissertação (Mestrado em Genética e Melhoramento de Plantas) – Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2019.

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