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Melatonina como antioxidante na criopreservação de sêmen de Brycon orbignyanus (Valenciennes, 1850)
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Resumo
Objetivou-se o aperfeiçoamento do protocolo de congelamento de sêmen para piracanjuba, utilizando diferentes curvas de congelamento e soluções contendo melatonina. Este estudo foi dividido em duas etapas. A primeira consistiu na avaliação do sêmen criopreservado em soluções contendo diferentes concentrações de melatonina e em diferentes tempos de permanência, em botijão de vapor de nitrogênio. A segunda etapa avaliou o sêmen diluído nas mesmas concentrações de melatonina das soluções da primeira etapa, no entanto, as mesmas foram criocongeladas em duas curvas diferentes: uma utilizando-se dry shipper e outra utilizando uma máquina de congelamento. As coletas de sêmen foram realizadas nas Estações de Piscicultura da Cemig, em Volta Grande e em Itutinga, nos períodos de piracema, em 2016-2017 e 2017-2018. O sêmen foi caracterizado por meio da observação de volume, aspecto, coloração, vigor e concentração espermática. Os parâmetros utilizados para a avaliação da qualidade das células espermáticas foram a taxa e a duração da motilidade, a integridade de membrana plasmática, a morfologia, perfil oxidativo e as taxas de fertilização e eclosão. As variáveis do perfil oxidativo foram avaliadas utilizando o programa Graph pad prism 6.0 e as demais variáveis do experimento foram analisadas com o auxílio do programa estatístico R. Para testar a normalidade foi realizado o teste de Shapiro-Wilks, em seguida efetuou-se a análise de variância (one-way ANOVA). As médias foram comparadas pelo teste de Tukey quando constatado efeito significativo (p<0,05). Na primeira etapa, somente para a taxa de fertilização foi observada diferença estatística significativa (p<0,05) na interação entre as soluções e os tempos no dry shipper. A solução M2 apresentou os melhores resultados em relação à solução controle, para os parâmetros de vitalidade, taxa de motilidade, tempos de motilidade e motilidade progressiva (85,2±2,8%, 64,63±8,3%, 84,22±11,4 seg, 17,01±1,2%). Na segunda etapa, observou-se diferença (p<0,05) entre as soluções nos parâmetros de vitalidade, morfologia, motilidade e taxa de fertilização. As soluções com melatonina apresentaram os melhores valores. No estresse oxidativo, apenas a peroxidação lipídica e a atividade de SOD apresentaram diferença (p<0,05) na interação curva e solução, mostrando as soluções com melatonina com os menores valores. Conclui-se que a adição de melatonina na concentração de 2 mM, associada ao crioprotetor metilglicol na solução de criocongelamento, melhorou a qualidade espermática, independentemente das curvas utilizadas.
Abstract
The objective was to improve the semen freezing protocol for piracanjuba, using different freezing curves and melatonin-containing solutions. This study was divided into two stages. The first, consisted of the evaluation of cryopreserved semen in solutions containing different concentrations of melatonin and at different residence times in a nitrogen vapor canister. The second evaluated the semen diluted at the same melatonin concentrations as the first stage solutions, however, they were frozen in two different curves: one using a dry shipper and another using a freezing machine. Semen collections were carried out at Cemig Fish Farming Stations in Volta Grande and Itutinga during the piracema periods in 2016-2017 and 2017-2018. Semen was characterized by observation of volume, appearance, coloration, vigor and sperm concentration. The parameters used to evaluate sperm cell quality were motility rate and duration, plasma membrane integrity, morphology, oxidative profile and fertilization and hatching rates. The oxidative profile variables were evaluated using the Graph pad prism 6.0 program and the other variables of the experiment were analyzed with the aid of the R statistical program. of variance (one-way ANOVA). Means were compared by Tukey test when significant effect was found (p <0.05). In the first stage, only for the fertilization rate was observed statistically significant difference (p <0,05) in the interaction between the solutions and the times in the dry shipper. The M2 solution presented the best results in relation to the control solution, for the parameters of vitality, motility rate, motility times and progressive motility (85.2 ± 2.8%, 64.63 ± 8.3%, 84, 22 ± 11.4 sec, 17.01 ± 1.2%). In the second stage, a difference (p <0.05) was observed between the solutions in the parameters of vitality, morphology, motility and fertilization rates. Melatonin solutions presented the best values. In oxidative stress, only lipid peroxidation and SOD activity showed differences (p <0.05) in the curve and solution interaction, showing the solutions with the lowest values. It was concluded that the addition of melatonin at a concentration of 2 mM, associated with the cryoprotectant methylglycol in the freezing solution, improved the sperm quality, regardless of the curves used.
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PALHARES, P. C. Melatonina como antioxidante na criopreservação de sêmen de Brycon orbignyanus (Valenciennes, 1850). 2019. 92 p. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2019.