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Otimização de protocolos de extração de RNA em diferentes tecidos de milho
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Associação Brasileira de Milho e Sorgo
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Áreas Temáticas da Extenção
Objetivos de Desenvolvimento Sustentável
Dados abertos
Resumo
Neste trabalho, foram testados cinco métodos de extração de RNA (CTAB
microextração, Concert™ Invitrogen, Concert™ Adaptado, TRI Reagente® Sigma e TRI
Reagente® Adaptado), em dois diferentes tecidos de milho (mesocótilo e raiz), com o
objetivo de estabelecer um método eficiente de extração de RNA, visando posteriormente
estudos de expressão gênica. Observou-se que o método Concert,utilizando o protocolo
adaptado, foi o mais eficiente para a extração de RNA de ambos os tecidos de plântulas
de milho, originando 2351,35 µg por 100 mg de tecido para mesocótilo e 893,75 µg
por 100 mg de tecido para raiz, considerando tanto a quantidade como a qualidade das
amostras, podendo ser submetidas às etapas posteriores de tratamento com DNAse e
construção de cDNA para estudos de expressão gênica. Pôde-se observar que pequenas
modificações nos protocolos, como, por exemplo, mudança no tempo e na posição dos
tubos durante a incubação e o incremento de duas lavagens com clorofórmio, podem
melhorar muito tanto a qualidade quanto a quantidade do RNA extraído.
Abstract
Five RNA extraction methods were tested (CTAB micro extraction,
Concert™ - Invitrogen; Concert™ adapted; TRI Reagent® - Sigma; TRI Reagent®
adapted) using two different maize tissues (mesocotyl and root), objectifying to establish
an efficient method to extract RNA to be later used in gene expression studies. Concert™
method using the adapted protocol was the most efficient for RNA extraction from both
tissues of maize seedlings, originating 2351.35 µg per 100 mg of mesocotyl and 893.75
µg per 100 mg of roots, considering both quantity and quality of the extracted RNA. Thus,
samples can be submitted to further steps, like DNAse treatment and cDNA synthesis,
for gene expression studies. Results showed that small modifications like change in time
and tube positioning during incubation and the use of two extra chloroform washings can
improve RNA amount, quality and integrity, from different tissues. These modifications
might be used in researches on gene expression.
Descrição
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Resumen
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PORTO, B. N. et al. Otimização de protocolos de extração de RNA em diferentes tecidos de milho. Revista Brasileira de Milho e Sorgo, [S.l.], v. 9, n. 2, p. 189-200, 2010.