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Prospecção de moduladores enzimáticos em extratos de fungos endofíticos isolados de cafeeiro

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Resumo

Microrganismos endofíticos vivem ao menos parte do seu ciclo de vida no interior de tecidos vegetais, sem causar dano aparente ao hospedeiro. Espécies endofíticas do gênero Muscodor são relatados como endofíticos produtores de metabólitos bioativos com potencial para aplicação na indústria farmacêutica. No presente trabalho, extratos da cultura de fungos endofíticos, isolados de cafeeiro, pertencentes ao gênero Muscodor, M. coffeanum (CML 4009, CML 4010 e CML 4020) e M. yucatanensis (CML 4016), foram estudados quanto aos efeitos moduladores que exercem sobre a atividade de enzimas que atuam na hemost ase. Os sobrenadantes foram obtidos após cultivo dos fungos em caldo ME (Extrato de Malte) e separação do micélio por filtração. Este, foi adicionado ao solvente acetato de etila na proporção de 1:0,5 (sobrenadante/acetato de etila) seguido de rotoevaporação para obtenção do extrato fúngico. Os extratos foram diluídos em Dimetilsulfóxido P.A. 99,9% (DMSO) e utilizados para avaliar atividade fosfolipásica, coagulação sobre plasma humano citratado, trombolítica, citotóxica sobre eritrócito humanos e proteolítica utilizando a caseína como substrato. Como fonte de fosfolipases A2 e ferramenta indutora de coagulação foi utilizada peçonha de serpente da espécie Bothrops atrox nas proporções:1:0,01; 1:0,25; 1:0,5 e 1:1 (peçonha: extrato; massa:massa). Os extratos de todos os fungos endofíticos avaliados promoveram um aumento significativo no tempo de coagulação induzida pela peçonha, principalmente, quando incubados previamente com o plasma sanguíneo. A atividade de fosfolipases A2 não sofreu alterações significativas, quando avaliada após incubação das enzimas com os extratos fúngicos, sugerindo a presença de mecanismos de interação específicos entre moléculas presentes nos extratos e proteases da peçonha avaliada.

Abstract

Endophytic microorganisms live at least part of their life cycle inside plant tissues, without causing apparent damage to the host. Endophytic species of the genus Muscodor are reported as endophytic producers of bioactive metabolites with potential for application in the pharmaceutical industry. Thus, in the present work, extracts from the culture of endophytic fungi isolated from coffee plants, M. coffeanum (CML 4009, CML 4010, and CML 4020) and M. yucatanensis (CML 4016), were prospected in enzyme modulation tests that act in human hemostasis. The fungi were grown in ME broth (Malt Extract), the mycelium separated by filtration, and the supernatant added to ethyl acetate in the proportion of 1: 0.5 (supernatant/ethyl acetate) to extract the compounds by rotary evaporation. The dry extracts were diluted in Dimethylsulfoxide P.A., 99.9% (DMSO) and then tested, in which Bothrops atrox venom was used as an enzyme source and tool to induce the activities. Prior to the evaluation of the activities, incubations of the extracts with the venom were performed in the proportions 1: 0.01, 1: 0.25, 1: 0.5, and 1: 1 (venom: extract; mass: mass). The extracts of all fungi promoted a significant increase in the clotting time induced by the venom, especially when incubated with blood plasma. The activity of phospholipases A2 did not change significantly when evaluated in the presence of fungal extracts. Thus, it is possible to suggest the presence of specific interactions between molecules present in extracts and venom proteases.

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BASTOS, A. P. da S. P. Prospecção de moduladores enzimáticos em extratos de fungos endofíticos isolados de cafeeiro. 2019. 46 p. Dissertação (Mestrado em Nutrição e Saúde)–Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2019.

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