dissertação
Development of an analytical method for determining linoleic and stearic acid in sheep serum samples
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Universidade Federal de Lavras
Faculdade, Instituto ou Escola
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Departamento de Química
Programa de Pós-Graduação
Programa de Pós-graduação em Agroquímica
Agência de fomento
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
Tipo de impacto
Áreas Temáticas da Extenção
Objetivos de Desenvolvimento Sustentável
Dados abertos
Resumo
O preparo de amostra é uma etapa importante na extração dos analitos de matrizes complexas
como as amostras biológicas. Os lipídios presentes nessas amostras podem ser encontrados
associados a lipoproteínas, o que dificulta a determinação do perfil dos ácidos graxos nos
organismos vivos. As técnicas tradicionais de análise como o método de Folch et al. (1957),
apesar de ainda serem muito utilizadas, apresentam diversas desvantagens como a grande
quantidade de solventes orgânicos utilizados, grande número de etapas, degradação dos
compostos com insaturações e elevada toxicidade. Nesse sentido, as técnicas miniaturizadas
são alternativas capazes de superar as inviabilidades dos métodos tradicionais. Dentre elas,
tem-se a microextração líquido-líquido dispersiva de baixa densidade (LD-DLLME), que
utiliza solvente de baixa densidade, menos tóxicos ao meio ambiente e em pequenas
quantidades. Assim, o objetivo do trabalho foi desenvolver, validar e aplicar uma metodologia
analítica para extração e determinação de ácido linoléico (AL) e esteárico (AE) em amostras
de soro sanguíneo de ovinos. O método desenvolvido utilizou a LD-DLLME com etapa de
esterificação e quantificação por cromatografia gasosa com detector por ionização em chama
(GC/FID). A extração foi otimizada através do planejamento de misturas com o modelo
polinomial de Scheffé. A inversa generalizada de Moore-Penrose foi aplicada ao modelo
cúbico completo (MCC) de Scheffé, para determinar os três coeficientes dij
concomitantemente possibilitando a interpretação química do modelo. A otimização avaliou
as variáveis da LD-DLLME volume do meio de dispersão (solução salina de MgCl2 0,017%),
volume do solvente extrator (tolueno) e volume do solvente de dispersor (metanol) e os
resultados indicaram que a melhor condição de extração foi de 1400 μL do meio de dispersão,
400 μL de solvente extrator e 1200 μL de solvente dispersor. O método proposto foi validado
para extração do ácido linoleico (AL) e para o ácido esteárico (AE) com bases nas diretrizes
do guia EURACHEM/2014. A avaliação do efeito de matriz (EM) para o método
desenvolvido foi classificado como alto e assim, todas as avaliações quantitativas foram
realizadas pelo método de adição de padrão. O desempenho do método demonstrou
seletividade, sensibilidade e precisão adequadas para ser aplicado em amostras reais,
apresentando uma recuperação média de 98,54% e 103,83% para o AL e para o AE
respectivamente. A LD-DLLME mostrou-se superior ao método de Folch et al. (1957), até
então utilizado na determinação de ácidos graxos em amostras de soro sanguíneo de ovinos.
Através da análise em amostras reais pode-se inferir que o método desenvolvido é eficiente no
monitoramento dessas substâncias no organismo de ruminantes.
Abstract
Sample preparation is an important step in the extraction of analytes from complex matrices
such as biological samples. The lipids present in these samples can be found associated with
lipoproteins, which makes it difficult to determine the profile of fatty acids in living
organisms. Traditional analysis techniques such as the method of Folch et al. (1957), although
they are still widely used, have several disadvantages such as the large amount of organic
solvents used, large number of stages, degradation of compounds with unsaturation and high
toxicity. In this sense, miniaturized techniques are alternatives capable of overcoming the
impossibilities of traditional methods. Among them, there is the low density dispersive liquid-
liquid microextraction (LD-DLLME), which uses low density solvent, less toxic to the
environment and in small quantities. Thus, the objective of the work was to develop, validate
and apply an analytical methodology for the extraction and determination of linoleic acid
(AL) and stearic acid (AE) in sheep blood serum samples. The developed method used
LD-DLLME with an esterification and quantification step by gas chromatography with flame
ionization detector (GC/FID). The extraction was optimized through the planning of mixtures
with the Scheffé polynomial model. The generalized inverse of Moore-Penrose was applied to
Scheffé's complete cubic model (MCC), to determine the three dij coefficients concomitantly
enabling the chemical interpretation of the model. The optimization evaluated the variables of
the LD-DLLME dispersion medium volume (0.017% MgCl2 saline), extractor solvent volume
(toluene) and dispersant solvent volume (methanol) and the results indicated that the best
extraction condition was 1400 μL of the dispersion medium, 400 μL of extractor solvent and
1200 μL of dispersant solvent. The proposed method was validated for extraction of linoleic
acid (AL) and for stearic acid (AE) based on the guidelines of the EURACHEM/2014 guide.
The evaluation of the matrix effect (EM) for the developed method was classified as high and
thus, all quantitative evaluations were performed using the standard addition method. The
performance of the method demonstrated selectivity, sensitivity and precision adequate to be
applied to real samples, showing an average recovery of 98.54% and 103.83% for the LA and
LA respectively. LD-DLLME proved to be superior to the method of Folch et al. (1957),
hitherto used in the determination of fatty acids in sheep blood serum samples. Through the
analysis in real samples it can be inferred that the developed method is efficient in the
monitoring of these substances in the body of ruminants.
Descrição
Área de concentração
Agência de desenvolvimento
Palavra chave
Marca
Objetivo
Procedência
Impacto da pesquisa
Resumen
Palavras-chave
ISBN
DOI
Citação
BAZANA, M. J. F. Development of an analytical method for determining linoleic and stearic acid in sheep serum samples. 2020. 66 p. Dissertação (Mestrado em Agroquímica)–Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2020.